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原始生殖细胞(primordial germ cells，PGCs)作为生殖干细胞，是禽类地方稀有品种遗传资源保存及通过转基因改良禽类品种的重要载体细胞。因此，PGCs的体内外发育研究，对建立禽类生殖腺嵌合体和转基因技术平台具有重要意义。17β-雌二醇(17β-estradiol，17β-E2)作为一种雌性激素，对多种细胞体细胞和生殖细胞的增殖具有重要促进作用。本研究以寿光鸡28期胚胎为试验材料，探讨了17β-E2对体内外性腺原始生殖细胞(Gonadal primordial germ cells，gPGCs)发育的影响。首先，制作28期鸡胚性腺组织切片，进行PAS和HE染色，并在显微镜下进行形态鉴定;其次，鸡胚发育到第X期，用鸡蛋开窗法注入17β-E2，封口孵化至28期，用EDTA-胰酶解离法消化性腺组织，分离获得gPGCs，观察和分析17β-E2对gPGCs体内发育的影响;第三，孵化至28期胚胎（未经17β-E2处理），分离性腺，将分离的PGCs和性腺基质细胞共培养，根据差速贴壁原理分离纯化PGCs，培养于添加不同浓度17β-E2的培养液，观察和分析17β-E2对gPGCs体外发育的影响。试验结果如下:
1、PGCs形态学研究
组织切片观察表明，gPGCs呈圆形或卵圆形，有伪足，直径为10μm-15μm，胞核呈圆形或椭圆形，偏向细胞边缘，大小为5μm-7.5μm。核内缘有少量异染色质，常染色质均匀分布。分离后的细胞悬液涂片观察表明，游离的gPGCs呈圆形或卵圆形，有伪足，周围有明显的光环，直径为12.5μm-20μm。
2、17β-E2对PGCs体内发育的影响
17β-E2处理组鸡胚的PGCs数量（1601±126个/枚）显著高于(P＜0.05)注射乳化剂对照组（1327.5±210.4个/枚）和未注射乳化剂对照组（1401.80±312.5个/枚）。
3、PGCs的分离纯化
分离未经17β-E2处理的28期寿光鸡胚胎性腺，经酶消化，总细胞数为(8.7±1.7)×104个/枚，其中gPGCs数量为1401.80±312.5个/枚，占总细胞数的1.61％。将分离后的gPGCs与性腺基质细胞共培养，经24h培养差速贴壁分离，获得总细胞数为1542±589个/枚，其中gPGCs为432.5±106.5个/枚，回收率为36.52±4.86％，纯度为28.1±1.9％，存活率71.7±2.2％。
4、17β-E2对体外培养寿光鸡原始生殖细胞的影响
将分离纯化的PGCs分别培养于添加不同浓度(0ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL)17β-E2的TCM199基础培养液中，培养1～6天。结果显示，5ng/mL添加组与0ng/mL添加组比较，PGCs的发育能力无显著差异，而10ng/mL和20ng/mL添加组与0ng/mL及5ng/mL添加组比较，PGCs的发育能力差异显著(P＜0.05)。但是，10ng/mL和20ng/mL添加组之间比较，PGCs的发育能力无显著差异。
上述结果表明，17β-E2对寿光鸡性腺原始生殖细胞体内外的发育都有明显的促进作用，可应用于禽类PGCs体外培养体系。