前言　　膀胱癌是泌尿外科临床上最常见的肿瘤，在我国，男性膀胱癌发病率位于全国恶性肿瘤的第七位，女性排在第十位以后。约90％的膀胱癌为尿路上皮癌，其中约70％为非肌层浸润性膀胱癌，预后好，但术后约10％-15％进展为肌层浸润性膀胱癌。而浸润性膀胱癌恶性程度较高，常浸润肌层，预后较差。因此，寻找治疗膀胱癌的有效方法，已成为膀胱癌研究领域的热点。　　Caspase募集域和膜相关鸟苷酸激酶样结构域蛋白(CARMA)家族是一种支架蛋白，含有CARMA1，CARMA2，CARMA3三个成员。最近的研究表明，CARMA3在G蛋白偶联受体和PKC诱导的NF-κB活化中发挥重要作用。CARMA3能够通过招募BCL10、MALT1和TRAF6，诱导NF-κB活化，调节免疫和炎症反应，促进肿瘤细胞生存、抑制肿瘤细胞凋亡，引起肿瘤恶性进展。在乳腺癌，肺癌，肾癌和结直肠癌中都发现了CARMA3的致癌作用。但到目前为止，CARMA3在膀胱癌中的作用及其生物学机制尚不清楚。　　本研究旨在检测CARMA3在膀胱癌组织及细胞系中的表达，探讨CARMA3在膀胱癌发生发展中的作用机制，为进一步的研究奠定基础，进而为膀胱肿瘤的诊断和治疗提供了新的靶点，也为膀胱癌复发、转移机制研究提供了新的视角。　　方法　　1、免疫组化方法检测CARMA3在膀胱癌组织及癌旁组织中的表达情况。　　收集90位膀胱癌患者标本，用免疫组织化学法检测膀胱癌和癌旁组织中的CARMA3的表达情况。　　2、WesternBlot和Real-timeRT-PCR方法检测细胞系中CARMA3蛋白和mRNA的表达水平。　　培养人膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1及膀胱癌细胞系BIU87，T24，5637共四种细胞，用WesternBlot和Real-timeRT-PCR方法检测CARMA3蛋白和mRNA的表达水平。　　3、应用siRNA转染5637和T24细胞系，应用WesternBlot及Real-timeRT-PCR检测沉默效率。　　瞬时转染膀胱癌细胞系5637和T24，实验设转染组及阴性对照组，转染方法和步骤参照脂质体说明书进行。转染48小时后收集细胞，提取总RNA，总蛋白，采用WesternBlot和Real-timeRT-PCR方法检验转染效率。　　4、CCK-8试剂盒和克隆形成实验检测转染后5637和T24细胞的增殖能力和克隆形成能力。　　5、应用WesternBlot检测沉默CARMA3后膀胱癌细胞中IκB，CyclinD1和Bcl-2的蛋白表达变化，应用Real-timeRT-PCR检测沉默CARMA3后膀胱癌细胞中CyclinD1和Bcl-2的mRNA的变化。　　6、荧光素酶报告基因检测沉默CARMA3后NF-κB的活性改变。　　结果　　1、CARMA3在膀胱癌组织中的表达情况。　　(1)38.8％(35/90)膀胱癌组织表达CARMA3。　　(2)CARMA3主要定位于细胞浆中。　　(3)CARMA3的表达与膀胱癌的分期(Ta-T1vsT2-T4，P=0.081)相关　　(4)CARMA3的表达与膀胱癌的病理分级(G1vsG2-G3，P=0.027)有关　　2、CARMA3在细胞系中的表达情况。　　(1)人膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1低表达CARMA3蛋白及mRNA。　　(2)膀胱癌细胞系5637和T24高表达CARMA3蛋白和mRNA。　　3、应用siRNA转染5637和T24后的沉默效率。　　转染siRNA48小时后，5637和T24细胞CARMA3蛋白及mRNA水平明显低于阴性对照组。　　4、转染CARMA3后对膀胱癌细胞的增殖能力和克隆形成能力的影响。　　(1)沉默CARMA3的5637和T24细胞的增殖能力明显低于转染对照组。　　(2)沉默CARMA3的5637和T24细胞的克隆形成能力明显低于对照组。　　5、沉默CARMA3后膀胱癌细胞中IκB蛋白的表达变化，CyclinD1和Bcl-2蛋白及mRNA的表达变化。　　(1)沉默CARMA3明显降低了p-IκB蛋白的表达，总IκB蛋白无明显变化。　　(2)沉默CARMA3明显降低了CyclinD1及Bcl-2蛋白及mRNA的水平。　　6、荧光素酶报告基因检测沉默CARMA3后NF-κB的活性改变。沉默CARMA3降低了NF-κB的活性　　结论　　CARMA3通过激活NF-κB信号传导通路促进了膀胱癌细胞的生长。CARMA3可能成为膀胱癌的一个候选治疗靶点。