目的本研究旨在检测miR-125b在软骨肉瘤细胞株和阿霉素耐药株中的表达差异,并进一步探讨miR-125b对软骨肉瘤细胞耐药性的影响及其作用机制。方法1.选取人正常软骨细胞株SNM83和6种人软骨肉瘤细胞株CSPG、OUMS-27、CH-2879、JJ012、CS-1和SW1353,随后构建阿霉素耐药软骨肉瘤细胞JJ012,采用Taq Man探针法检测miR-125b在正常软骨细胞、软骨肉瘤细胞以及阿霉素耐药软骨肉瘤细胞中的表达水平。2.采用MTT法检测阿霉素耐药细胞及其亲代细胞在不同浓度阿霉素作用下,软骨肉瘤细胞活力变化。采用Western blot检测细胞凋亡信号cleaved PARP在阿霉素作用后,亲代及耐药软骨肉瘤细胞中的表达水平。3.选取三株软骨肉瘤细胞JJ012、CH-2879和SW1353,转染pre-miR-125b后,采用MTT法、荧光定量PCR和Western blot检测过表达miR-125b对软骨肉瘤细胞增殖能力、肿瘤细胞耐药性和葡萄糖代谢的影响。4.利用在线生物信息学软件（Target Scan,Pictar和Micro RNA）预测miR-125b的靶基因,然后利用荧光素酶报告系统验证并筛选miR-125b靶基因。5.在软骨肉瘤细胞中单独过表达miR-125b或者同时过表达miR-125b及其靶基因,然后采用MTT法、荧光定量PCR和Western blot检测miR-125b靶基因对软骨肉瘤细胞糖代谢和耐药性的影响。6.在耐药性软骨肉瘤细胞中单独过表达miR-125b或者同时过表达miR-125b和乳酸脱氢酶A（LDHA）,然后采用MTT法、荧光定量PCR和Western blot检测软骨肉瘤细胞糖代谢和耐药性的变化。结果1.miR-125b在人正常软骨细胞和六种人软骨肉瘤细胞株中均呈现不同程度的表达;和人正常软骨细胞SNM83相比,miR-125b在软骨肉瘤细胞株CSPG,OUMS-27,CH-2879,JJ012,CS-1和SW1353中的表达水平显著下降。阿霉素耐药JJ012细胞株中的miR-125b表达水平下降最多。2.未用阿霉素处理时,细胞凋亡标志基因PARP-1在耐药软骨肉瘤细胞JJ012及其亲代细胞中的表达水平无明显差异,细胞凋亡信号cleaved PARP则呈现很低的表达水平。在阿霉素作用后,亲代细胞中cleaved PARP的表达水平明显升高。3.miR-125b过表达抑制软骨肉瘤细胞JJ012、CH-2879和SW1353的增殖,并增强对阿霉素药物敏感性;和亲代JJ012细胞相比,阿霉素耐药JJ012细胞的葡萄糖摄取水平和乳酸含量显著升高,葡萄糖代谢相关酶（HKII、PDK1、LDHA）的m RNA和蛋白表达均上调,而miR-125b过表达明显抑制肿瘤细胞中葡萄糖摄取、乳酸生成以及葡萄糖代谢相关酶（HKII,PDK1,LDHA）的表达水平。4.生物信息学软件预测结果显示Erb B2 3’-UTR区域含有miR-125b的高度保守结合序列;在软骨肉瘤细胞中,过表达miR-125b可以显著抑制Erb B2的蛋白表达水平;与此相反,抑制miR-125b则可以促进软骨肉瘤JJ012和CH-2879细胞中Erb B2的蛋白表达;共转染miR-125b和野生型Erb B2的软骨肉瘤细胞的荧光素酶活性明显受到抑制,而共转染miR-125b和突变型Erb B2的软骨肉瘤细胞的荧光素酶活性没有明显变化。5.在正常表达Erb B2的JJ012细胞中,过表达miR-125b抑制葡萄糖摄取、乳酸生成以及HKII、PDK1、LDHA的表达水平,而过表达Erb B2则可以逆转这一过程;和单独转染pre-miR-125b的JJ012细胞相比,同时转染Erb B2和premiR-125b的肿瘤细胞的耐药性明显增强。6.在耐药软骨肉瘤细胞株过表达miR-125b可以逆转阿霉素耐药性;阿霉素耐药软骨肉瘤细胞株Erb B2和葡萄糖代谢相关酶HKII、PDK1和LDHA的表达水平明显升高,而过表达miR-125b则可以抑制Erb B2、HKII、PDK1和LDHA的表达,并降低耐药细胞株的葡萄糖摄取和乳酸生成量;同时过表达葡萄糖代谢关键酶LDHA和miR-125b的软骨肉瘤细胞则仍保持对阿霉素的耐药性。结论1.miR-125b在软骨肉瘤细胞株和阿霉素耐药性软骨肉瘤细胞株的表达水平明显降低。2.过表达miR-125b可以抑制软骨肉瘤细胞增殖,降低软骨肉瘤细胞葡萄糖代谢水平,提高软骨肉瘤细胞对阿霉素的敏感性。3.Erb B2是miR-125b的特异性靶基因。4.miR-125b通过靶基因Erb B2调控葡萄糖代谢水平,从而实现miR-125b的化疗药物增敏作用。