林蛙抗菌肽是从林蛙皮中提取出来的一种具有高效、广谱抗菌作用的动物抗菌肽。研究发现这类抗菌肽对革兰氏阳性菌、阴性菌具有强力的抑制作用,而且还具有一定的抗炎、镇痛作用,是极具开发前景的良好抗菌药物。本实验是想尝试在维持林蛙抗菌肽的良好生物活性的基础上,设计一种新的林蛙抗菌肽外用剂型,解决现阶段林蛙抗菌肽剂型抗菌肽生物利用率低,给药周期短的缺点,同时降低林蛙抗菌肽使用过程中对人体的损伤。脂质体是一种人工生物膜,是由磷脂组成的具有双分子层结构的球形脂质囊泡,不仅具有生物相容性高、无毒、无免疫原性、稳定性高等特点,而且还具有缓慢释放的作用,用于药物释放系统安全可靠。本实验制备的林蛙抗菌肽脂质体包封率高,抑菌效果好,抑菌时间长,稳定性好,而且皮肤滞留率高。本文主要包括以下内容:1.林蛙抗菌肽体外分析方法学的建立本实验采用BCA法作为林蛙抗菌肽体外分析的测定方法,建立的标准曲线线性良好,可信度高,利用该方法得到的林蛙抗菌肽的重复性、方法回收率以及仪器精密度均符合体外分析测定的标准。利用该方法测定了林蛙抗菌肽提取液中抗菌肽的含量,并利用该方法与超滤离心法结合建立了林蛙抗菌肽脂质体的包封率测定方法。2.林蛙抗菌肽脂质体的制备与处方优化实验从薄膜分散法、乙醇注入法和薄膜均质法中筛选出了林蛙抗菌肽脂质体的最佳制备工艺——薄膜分散法,该方法制备得到的林蛙抗菌肽脂质体包封率高,粒径大小适中,稳定性高。然后利用单因素分析法考察了蛋黄卵磷脂含量、磷脂与胆固醇比例、脂药比和磷酸缓冲液的pH值对林蛙抗菌肽脂质体包封率的影响,接着将筛选出来的3个主要影响因素(蛋黄卵磷脂含量、磷脂与胆固醇比例、脂药比)作为优化目标,利用响应面设计分析和模型拟合,筛选出制备林蛙抗菌肽脂质体的最优处方为:蛋黄卵磷脂含量39.2 mg,磷脂与胆固醇比例为3.84/1,脂药比为4.36/1,林蛙抗菌肽脂质体药物的理论包封率为79.08%,实际包封率为78.98%。3.林蛙抗菌肽脂质体的药效学考察实验通过抑菌率和抑菌圈实验对林蛙抗菌肽脂质体的抑菌效果进行考察,林蛙抗菌肽脂质体的抑菌效果良好,抑菌时间比林蛙抗菌肽的抑菌时间长。然后通过透皮率实验测定林蛙抗菌肽脂质体的皮肤透过率,计算出林蛙抗菌肽脂质体的透皮率仅6%,皮肤残留率高,有效的降低了林蛙抗菌肽使用过程中的生物毒性。4.林蛙抗菌肽脂质体质量标准与稳定性考察实验利用Zetasizer纳米粒度电位仪测定了林蛙抗菌肽脂质体的粒径和电位,使用扫描电镜仪观察了林蛙抗菌肽脂质体的微观形态。然后分别进行了影响因素实验(包括温度、光照、湿度以及冻融)、加速实验以及长期实验,影响因素实验发现林蛙抗菌肽脂质体在高温(60℃)、高湿(90%)以及光照条件下,包封率和外观状态没有太大变化;之后的加速实验和长期实验发现林蛙抗菌肽脂质体的外观状态和包封率也没有太大变化,说明林蛙抗菌肽脂质体的稳定性良好。