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利用EST和RACE技术,克隆到5个油质蛋白的全长cDNA序列(Aho1eo 14.3,Aholeo 14.4, Aholeo 16.9,Ahleo 17.8,Aholeo 18.5)。其中Aholeo 14.3和Aholeo 14.4的氨基酸同源性为97%,为同一基因的两个variants。Southernbolt分析表明,这些油质蛋白基因在基因组中拷贝数为1-2个。氨基酸同源性分析将它们分为两类,其中Aholeo 17.8和Aholeo 18.5为高分子量油质蛋白,Aholeo 14.3、Aholeo 14.4和.Aholeo 16.9属于低分子量油质蛋白。对开放读码框进行PCR扩增证实它们不存在内含子。半定量RT-PCR分析表明4个油质蛋白基因只在花生种子各个时期表达,在根、茎和叶中无表达。
花生球蛋白是重要的一种贮藏蛋白,不仅为种子萌发提供足够的营养,而且其中一部分属于花生过敏原。在本实验室已有研究的基础上,克隆到花生球蛋白基因Aral和Ara 3的上游启动子区域,分别为410bp和657bp。同时还克隆了Ara 5的基因组DNA序列(3265bp,其中上游启动子区域为398bp)。Ara 5的基因组DNA序列中含有3个内含子,分别为429bp、249bp和99bp。对3个基因的上游序列的顺式元件分析结果表明,这些基因除了含有多个调控启动转录过程的TATA-boxes、CAAT-box外,均含有可能参与种子的特异表达的元件,如RY-repeated element、legumin box、ACTG-core elements和E-box。将克隆得到的Ara l上游启动子区410bp序列和Ara 3的上游643bp序列分别与pBll01.1的GUS基因相连构建表达载体pBAl和pBA3并通过农杆菌介导转化拟南芥。在pBA3和pBAl的转化植株中检测GUS活性,结果表明Ara 1和Ara 3启动子只驱动GUS基因在种子中表达,转基因种子萌发9天后检测不到GUS活性。GUS荧光定量测定表明,Ara 3和Ara 1分别比CaMV35S启动子强6倍和10倍。半定量RT-PCR分析结果表明,Ara 3和Ara 5只在发育花生种子中表达,而在花生的根、茎和叶中不表达。