新疆石河子地区目前拥有优质荷斯坦奶牛6万余头，奶牛乳房炎发病率较高，对其防治是目前迫切需要解决的技术难题；本研究借鉴前人研究资料，立足本地，通过对与奶牛隐性乳房炎相关的基因多态性分析，探讨不同基因型与奶牛隐性乳房炎之间的相互关系，寻找与奶牛隐性乳房炎易感或具有抗性的基因型，探讨免疫增强剂、中草药制剂和自拟中药制剂对不同基因型奶牛隐性乳房炎的治疗效果，为奶牛隐性乳房炎的综合防治提供理论基础。 一、荷斯坦奶牛隐性乳房炎易感性基因型检测。 （一）隐性乳房炎奶牛四个微卫星座位的遗传变异分析。 选择牛23号染色体上四个微卫星标记，用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法对石河子150团牛场80头隐性乳房炎奶牛和70头健康奶牛进行了遗传变异检测分析，利用最小二乘法拟合线性模型，探索四个微卫星座位与牛乳中体细胞数的关系。 结果表明：BM1818，BM1443，BM1258和BM1905四个微卫星座位在奶牛群体中分别检测出5，7，7，和7个等位基因，等位基因长度范围分别是268bp-282bp、148bp-170bp，92bp-114bp和185bp-205bp；四个微卫星座位表现出高度多态性，每个座位的多态信息含量分别为0.7404，0.7508，0.8363和0.7977；四个微卫星座位在奶牛群体中的杂合度分别为0.7766，0.8134，0.8550和0.8251；有效等位基因数分别为4.476，5.3604，6.8980和5.7160。四个座位微卫星标记与体细胞之间有显著的相关性。其中微卫星BM1818座位271bp/268bp，BM1258座位102bp/92bp，BM1443座位170bp/164bp，BM1905座位195bp/190bp，对应的体细胞数均值较低，对乳房炎抗性而言它们是各自座位上有利的基因型；因此，利用微卫星标记，对SCC进行标记辅助选择，控制乳房炎的发生是可行的。 （二）荷斯坦奶牛BoLA-DRB3基因多态性与隐性乳房炎相关性分析。 本试验主要研究BoLA-DRB3的基因多态性与本地进口荷斯坦奶牛隐性乳房炎相关性，确定其某种基因型与隐性乳房炎的抗性或易感性存在关联，为乳房炎抗病育种奠定基础。首先采用BMT试剂对石河子147团牛场进行隐性乳房炎调查，根据结果选取隐性乳房炎和健康奶牛各80头，颈静脉采血，酚氯仿抽提法提取基因组，溶于TE中，PCR扩增后用Hae Ⅲ和Bst YⅠ酶切，通过PCR-RFLP方法分析BoLA-DRB3基因多态性与隐性乳房炎相关性。 结果：PCR扩增得到一个305bp的特异性片段；Hae Ⅲ酶切结果得到3个等位基因和6个基因型；其中基因型AB，从频率较高，BC频率最低，HaeⅢ酶切位点的碱基突变偏离Hardy-Weinberg平衡状态（P<0.01），基因型HaeⅢAB与乳房炎易感性有关（P<0.01），HaeⅢBB与高SCC相关（P<0.01）；基因型HaeⅢAA与乳房炎抗性有关（P<0.01），Hae ⅢAA与低SCC相关。BstYⅠ酶切得到2个等位基因和3个基因型。其中基因型从频率最高，基因型BB频率最低。Bst YⅠ酶切位点碱基突变达到Hardy-Weinberg平衡状态。BsT YⅠ酶切基因型和基因频率在隐性乳房炎和健康牛中的分布差异均不显著（P>0.05）。 （三）牛乳铁蛋白（bLf）基因启动子区多态性与隐性乳房炎相关分析。 采用BMT结合SCC方法检测奶牛隐性乳房炎的发病情况，然后用PCR-RFLP技术，检测80头健康奶牛（对照组）、80头隐性乳房炎（试验组）bLf启动子区域多态性。 结果发现：健康与隐性乳房炎奶牛bLf启动子区域均存在多态性，其基因型频率分别为：对照组中从型为0.6247，AB型为0.2534，BB型为0.1219；试验组中从型为0.0945，AB型为0.1622，BB型为0.7433；基因频率：对照组中A频率为0.7548，B频率为0.2452；试验组A频率均为0.1846，B频率均为0.8154。牛乳铁蛋白启动子区在Hinf Ⅰ酶切位点存在多态性，其酶切位点由2种共显性等位基因控制。在健康奶牛中，AA基因型频率显著高于试验组，差异极显著（P<0.01）。在隐性乳房炎奶牛中，以BB基因型为主，与对照组相比差异极显著（P<0.01）。AB基因型频率在2组中不存在显著差异（P>0.05）。两组奶牛bLf启动子区域存在限制性片段长度多态性，且与乳房炎发病率存在一定关系。 （四）隐性乳房炎奶牛IL-8受体与bLf基因的PCR-SSCP分析。 采用PCR-SSCP技术分别对80头健康和隐性乳房炎奶牛的IL-8受体基因、bLf进行了多态性分析，并与相对应的奶牛乳中体细胞数进行了相关分析；结果表明：IL-8受体和bLf存在多态性，并且两者都与奶牛隐性乳房炎存在关联；IL-8受体CXCR2基因分离出7种SSCP带型，在健康奶牛中，SSCP5、SSCP7出现个体较多，同其他基因型比较差异显著（P<0.05），说明个体对隐性乳房炎表现良好的抗性；隐性乳房炎奶牛中，SSCP1、SSCP4出现个体较多，同其他基因型比较差异显著（P<0.05），说明个体对隐性乳房炎易感。bLf的5’调控区PCR产物经过SSCP分析后，分离出了3种SSCP带型，健康奶牛中SSCP1出现个体同其他基因型比较，差异显著（P<0.05），SSCP1对奶牛隐性乳房炎有很好的抗性，SSCP2在隐性乳房炎奶牛中出现较多，说明个体对隐性乳房炎易感。 二、隐性乳房炎奶牛不同基因型的药物治疗试验。 （一）BoLA-DRB3不同基因型奶牛隐性乳房炎的治疗试验。 使用BMT试剂石河子某牛场进行隐性乳房炎调查，根据结果选取隐性乳房炎80头，酚氯仿法提取DNA，PCR扩增后用Hae Ⅲ和Bst YⅠ酶切，通过PCR-RFLP方法分析，选择Hae ⅢAB、Hae ⅢBB，Bst YⅠBB三种基因型隐性乳房炎奶牛各8头，按剂量7.5mg/kg口服盐酸左旋咪唑（LMS），间隔10d天用药一次，20天后分别采集各组乳样，血样检测治疗前后乳中体细胞数量、乳成分变化和血液生理指标。结果：用药后三个试验组奶牛T淋巴细胞数量百分比增高（P<0.01），T淋巴细胞数量也显著增高（P<0.05），白细胞总数明显增高（P<0.05）。用药后三种基因型奶牛乳中体细胞数量显著下降，产奶量上升，乳成分变化差异不显著（P>0.05），且对隐性乳房炎奶牛治愈率分别为87.5％、75％和62.5％，差异显著（P<0.05），从治疗结果看出LMS对具有较高SCC的三种基因型（HaeⅢAB、HaeⅢBB，BstYⅠ BB）的24头奶牛表现良好是治疗效果，但治愈率差异显著（P<0.05）。 （二）乳铁蛋白5’调控区不同基因型奶牛隐性乳房炎的治疗试验。 试验对80头隐性乳房炎奶牛乳铁蛋白5’调控区基因进行分析，得到3种SSCP带型，即SSCP1、SSCP2、SSCP3三种基因型；使用自拟中草药制剂对每种基因型的8头奶牛进行治疗试验，统计治疗前后的产奶量、乳成分变化、乳中体细胞变化和部分血液指标，综合分析治疗效果。结果表明：试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组奶牛头数治愈率分别为75.0％、50.0％和87.5％，乳区治愈率分别为71.9％、40.6％和81.3％，治疗效果存在差异；用药后，试验Ⅱ组周平均产奶量增加4.31％，乳中体细胞平均数下降57.67％，与试验Ⅰ组、Ⅲ组相比差异显著（P<0.05），用药后对三组奶牛血液中T淋巴细胞数、白细胞总数均有提高（P<0.05），三组奶牛血清中总蛋白、球蛋白、白蛋白、血清SGPT、ALP、CPK活性与用药前比较差异不显著（P>0.05），说明自拟中草药制剂对不同基因型奶牛的隐性乳房炎治疗存在差异，对试验Ⅰ组、Ⅲ组的治疗效果明显好于试验Ⅱ组（P<0.05）。 （三）乳铁蛋白启动子区不同基因型奶牛的隐性乳房炎治疗试验。 应用BMT方法，结合乳中体细胞数量选择30头胎次、泌乳期、产奶性能相近的隐性乳房炎奶牛，根据bLf启动子序列基因型分析结果进行分组，每组10头奶牛，每头奶牛每天肌注乳炎康注射液30ml，连用5日，检测治疗前后乳中体细胞数量和血清中自由基变化特点，分析各基因型与治疗效果的关系。 结果：乳炎康注射液对三种基因型（三组）隐性乳房炎奶牛治愈率存在差异，其中BB型奶牛组治疗效果显著低于从型和AB型两组奶牛（P<0.05），用药后，各组奶牛血清SOD活力均升高，其中Ⅰ组、Ⅱ组血清SOD活力升高达显著水平（P<0.05），各组血清GSH-PX活性均升高，Ⅱ组升高达到显著水平（P<0.05），各组血清总抗氧化能力（T-AOC）含量均升高，且差异显著（P<0.05）。三组血清MDA含量均显著降低，差异不显著。Ⅱ组血清NO含量降低达到显著水平（P<0.05）。乳炎康注射液对乳铁蛋白不同基因型奶牛隐性乳房炎的治疗效果差异显著，使隐性乳房炎奶牛血清中SOD，GSH-PX和T-AOC活性升高、MDA、NO含量降低。