醛固酮对大鼠肾小球系膜细胞表达结缔组织生长因子的影响

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目的 研究醛固酮是否能刺激结缔组织生长因子的表达,以及其信号通路是否通过它的核受体经转化生长因子β1介导。 方法 醛固酮(aldosterone,ALD,10-7mol/l)加入培养的大鼠肾小球系膜细胞,分别于共同培养0h、6h、12h、18h、24h后应用逆转录聚合酶联反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)的方法评价结缔组织生长因子(connetive tissue growth factor,CTGF)mRNA的表达改变,应用免疫细胞化学方法评价CTGF蛋白的表达水平;应用酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent,ELISA)方法检测转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)蛋白的表达水平;分别应用醛固酮受体拮抗剂安体舒通(spironolactone,SPI,10-8mol/l)和TGF-β1/Smads信号通路的特异性丝、苏氨酸激酶抑制剂Staurosporine(STA,5nmol/ml),评价其对醛固酮刺激肾小球系膜细胞表达CTGF、TGF-β1的影响。 结果 未加醛固酮刺激的肾小球系膜细胞CTGFmRNA和蛋白表达水平较低,醛固酮(10-7mol/l)刺激后肾小球系膜细胞CTGFmRNA和蛋白表达水平增加,6h活性已渐增高,12h达高峰,18h开始下降,24h降至较低水平,(12h,0.46±0.08;对照组,0.20±0.03;P<0.05),且呈剂量依赖性;先用醛固酮受体拮抗剂安体舒通(10-8mol/l)干预1h后再用醛固酮(10-7mol/l)刺激,未见CTGFmRNA和蛋白表达水平增加(P>0.05);经醛固酮(10-7mol/l)刺激24h后检测发现肾小球系膜细胞培养上清液中TGF-β1蛋白表达水平明显增加,(297.53±15.25ng/ml;对照组,180.47±10.57ng/ml;P<0.05),而经安体舒通(10-8mol/l)干预1h后,抑制了TGF-β1蛋白表达;TGF-β1/Smad2信号通路中的的特异性丝、苏氨酸激酶抑制剂Staurosporine(5nmol/ml)预处理1h后再用醛固酮(10-7mol/l)刺激,则CTGF的mRNA和蛋白表达水平均无显著变化,(P>0.05)。 结论 醛固酮能上调肾小球系膜细胞表达结缔组织生长因子,醛固酮刺激结缔组织生长因子表达通过其核受体经TGF-β1途径来介导。
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