第一部分 MMPs在大鼠牙周组织改建中的表达和分布 本实验通过建立SD大鼠正畸牙齿移动模型，采用组织学观察、原位杂交染色方法观察MMP-2和MMP-9在移动牙齿牙周组织中的表达和分布。实验选用两月龄健康雄性大鼠，随机分为5组：空白对照组、牙齿移动1d组、3d组、6d组和10d组。制作牵引矫治器，安装于大鼠上颌切牙和第一磨牙之间并加力。利用前牙支抗牵引第一磨牙近中移动。分别于1d、3d、6d和10d处死大鼠并切取牙齿移动侧牙槽骨，经固定、脱钙和包埋制成组织切片。采用HE染色、原位杂交染色方法研究牙齿受力移动的不同阶段牙周组织中MMP-2和MMP-9表达和分布的变化。 组织学观察结果显示受力牙齿与未受力牙齿牙周组织中都存在一定程度的改建。未受力牙齿牙周组织的改建缓慢而持续，表现为牙根近远中侧牙槽骨边缘散在的破骨细胞骨吸收陷窝以及局部新骨形成区域表面线形排列的成骨细胞。而受力牙齿近通中侧牙周组织的改建存在明显不同，表现为近中压力侧牙槽骨边缘存在大量的破骨细胞骨吸收陷窝，而远中张力侧牙 第四军医大学硕士学位论文槽骨边缘有连续的新骨形成，其表面有大量成骨细胞呈规则的线性排列。近中压力侧牙周膜厚度变薄，牙周纤维中有大量排列紊乱的成纤维细胞。而远中张力侧牙周膜增宽，成纤维细胞排列较规则，与牙周纤维呈平行排列。 原位杂交染色结果显示空白对照组与牙齿受力移动组牙周组织中均有不同程度的 MMP上和 MMP习的表达。而受力牙齿牙周组织中 MMPs 的 mRNA的表达明显强于对照组，并且随着受力时间的增长而增强，在 6d达到高峰，10d趋于稳定。MMP上 的 mRNA的阳性表达主要存在于受力牙齿远中侧牙周组织中的成骨细胞和成纤维细胞胞浆中，而 MMPq 的 mRNA的阳性表达主要存在于受力牙齿近中侧牙槽骨中的破骨细胞胞浆中。结果表明MMPS参与了牙齿受力移动过程中牙周组织的改建。通过对MMP＜和MMPq的基因表达的研究为进一步探讨牙齿受正畸力作用移动时基质金属蛋白酶在牙周组织的改建过程中所友挥的作用奠定了基础。第二部分 成骨细胞原代培养以及MMP上和＊MP习的基因 表达 本实验通过对骨髓基质细胞的体外培养，观察大鼠骨髓基质细胞在两种培养基中向成骨细胞的分化及其体外成骨表型。并使用原位杂交染色方法探测MMP2和MMPq在体外培养成骨细胞中的基因表达。将源于4只雄性年轻SD大鼠股、旺骨骨髓的基质干细胞置于普通完全培养基及加入地塞米松、6－磷酸甘油钠、L－抗坏血酸等诱导成份的a－MEM培养基中，观察骨髓基质干细胞在此两种条件下向成骨细胞的分化、增 第四军医大学硕士学位论文殖。大鼠骨髓基质干细胞在加入诱导成份培养基中生长，其胶元、矿化结节形成及碱性磷酸酶活性等明显优于在普通培养基中的成骨表型，但其细胞增殖受到抑制。地塞米松能加强骨髓基质干细胞向成骨细胞的分化，但抑制其增殖；p－磷酸甘油钠提供矿化必需之磷酸根离子；而L－抗坏血酸则有利于胶元白 合成。 原位杂交结果显示体外培养成骨细胞胞浆中有很强的MMP上基因表达，而未见 MMP4的基因表达。体外实验结果与活体实验结果相符表明成骨细胞合成、分泌 MMPZ，而 MMPg基因主要在破骨细胞中表达。