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目的：本实验拟探讨miRNA-365在慢性吗啡耐受大鼠的脊髓及背根神经节的分布情况及细胞表达类型,并探寻miRNA-365调节吗啡耐受形成及维持的相关靶基因。方法：1.建立吗啡耐受模型：12只雄性SD大鼠,体重250-300g,采用改良Yaksh法鞘内置管成功后,大鼠随机分为两组：吗啡耐受组(morphine tolerance group, MT组)及生理盐水对照组(saline control group, NS组)。MT组大鼠连续6天鞘内注射10ul (1ug/ul)吗啡,每天两次(早8：00,晚20：00),建立慢性吗啡耐受模型；NS组大鼠则连续6天在同一时间点鞘内注射10ul生理盐水。在第1、3、5、7天采用甩尾实验(tail-flick test)测量大鼠甩尾热痛阈,并将结果转化为%MPE。2.原位杂交及免疫荧光双标染色：大鼠4%多聚甲醛灌注后,取脊髓及背根神经节标本制作成冰冻切片,行原位杂交实验观察miR-365在脊髓及背根神经节的分布情况,并结合免疫荧光双标实验观察miR-365细胞的表达类型。3.miR-365靶基因预测：利用生物信息学软件Target-Scan、 miRanda及miRDB数据库,预测miR-365的潜在靶基因。结合文献,从中筛选出与吗啡耐受相关的基因,通过双荧光素酶报告系统对筛选出的靶基因进行验证。结果：1.NS组大鼠各测量时间点%MPE无明显变化(P>0.05)。MT组大鼠第1天注射吗啡后,其%MPE较对照组明显升高(P<0.05)。连续处理后吗啡镇痛效应逐渐减弱,至第7天,MT组的%MPE与对照组相比差异无统计学意义(P<0.05)。2.原位杂交实验显示,miR-365在大鼠脊髓灰质中广泛表达。结合免疫荧光双标实验,发现其主要表达在神经元中。miR-365在背根神经节中同样表达在神经元,且在大、中、小直径神经元中皆有表达。在两种组织中,与生理盐水组相比,吗啡耐受组miRNA-365表达量均下调(P<0.05)。3.取三种数据库筛查结果的交集,发现吗啡耐受关键蛋白β-arrestin2可能是miR-365的靶基因。经双荧光素酶实验验证,证实β-arrestin2确为miR-365的靶基因。结论：miR-365定位表达于脊髓背角及背根神经节的神经元中。在吗啡耐受大鼠中其表达量下调。通过生物信息学分析及双荧光素酶报告系统,证明了β-arrestin2为miR-365的靶基因,为进一步研究miR-365与吗啡耐受的关系奠定了理论基础。图16幅,参考文献105篇