茁霉多糖(pullulan)是由出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)菌株分泌的一种胞外微生物多糖,是一种天然的水溶性、中性葡聚糖。茁霉多糖无色、无味、无毒、耐热、耐盐、耐酸碱,具有极好的成膜性、成纤性、水溶性、粘结性,易生物降解,可广泛应用于食品、医药、日用化工、建材、造纸、印刷、电子、烟草等产业,是一种新型多功能大分子生物产品。由于本身可以被微生物降解,不会对环境造成污染,是一种极具经济价值和开发潜能的新型环保生物材料。茁霉多糖应用广泛,前景广阔,但价格昂贵,国内一直没有大规模生产,主要是因为在发酵过程中,出芽短梗霉会分泌出与黑色素(melanin)类似的黑色或墨绿色物质,这种物质牢固地粘附在茁霉多糖上,很难除去。选育低色素高产量的菌株是从根本上解以上问题的方法。本课题在前期诱变(紫外线和亚硝基胍诱变)的基础上采用基因工程的方法进行育种研究,目的性强,效率高,是简化生产工艺,降低生产成本,实现大规模工业化生产的有效途径。本研究以出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)——购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,菌株的编号是：CGMCC N0.3.837—为出发菌株,先使用紫外线和亚硝基胍进行前期诱变,诱变出低色素菌株,之后运用基因工程的方法克隆出控制茁霉多糖产量的焦磷酸化酶(UDPGase),以达到构建低色素高产茁霉多糖菌株的目的,为大规模工业化生产茁霉多糖打下基础。本研究主要内容和结果如下：(1)通过紫外线和亚硝基胍对出芽短梗霉进行诱变,经多轮诱变获得了一株低色素产茁霉多糖菌株f61,无论是发酵液颜色还是发酵所生产的多糖的颜色都比出发菌株有很大的降低,出发菌株的发酵液为黑色或墨绿色,所产多糖为黑色,菌株f61的发酵液为淡黄色,所产多糖为白色或微黄色。(2)利用简并引物PCR的方法克隆出对茁霉多糖产量有重要影响的关键酶---焦磷酸化酶(UDPGase)---基因。把目的基因与pMD19-T载体连接,之后转入大肠杆菌DH5α感受态细胞,经过培养后对阳性克隆子进行筛选,提取质粒,最后由电泳检测重组质粒的大小,结果表明：目的基因与载体成功连接,基因克隆成功。