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血管内皮细胞功能的失调不仅引发血管疾病,还会导致人体的其它多种疾病。血管内皮细胞凋亡与动脉粥样硬化和多种血管退行性疾病有直接的关系。因此,抑制血管内皮细胞凋亡对防治这些重大血管疾病具有重要意义。我们的先前研究表明,去除血清和FGF-2可以诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)凋亡,本论文利用该实验模型,从化学遗传学角度出发,以新的吡唑衍生物为工具,筛选血管内皮细胞凋亡抑制剂并研究其发挥作用的分子机制。研究方法:1.血管内皮细胞的提取和培养,参考Jaffe等的方法[Jaffe et al,1973]2.倒置相差显微镜观察细胞形态变化3.MTT检测细胞存活率4.吖啶橙染色结合激光扫描共聚焦显微镜观察,检测细胞核凝集5.TUNEL染色检测DNA片段化和细胞凋亡率6.免疫荧光化学检测血管内皮细胞膜整连蛋白β4,p53的水平7.荧光探针DCHF检测ROS表达水平研究结果:1乙烷基3-(o-氯苯基)-5-甲基-1H-g比唑-羧酸酯(4a)(100μM),乙烷基5-甲基-3-(o-硝基苯基)-1H-吡唑-4-羧酸酯(4b)(100μM),均能显著抑制HUVECs存活;1-苯基-3-p-甲苯基-1H-吡唑-5-ol(4f)(25μM)显著提高HUVECs存活率。2乙烷基3-(o-氯苯基)-5-甲基-1-苯基-1H-吡唑-羧酸酯(4d,MPD)(20,25μM)抑制去除血清和FGF-2诱导的血管内皮细胞凋亡,但是在50,100μM时促进凋亡。3 MPD(25μM)可显著抑制由于去除血清和FGF-2而导致的膜整连蛋白β4和p53蛋白水平的升高。4 MPD(25μM)可降低细胞内ROS水平。5在有血清和FGF-2存在时,MPD(25,50,100μM)对HUVECs形态和存活率没有影响。6当分别用100μM 4a和50,100μM 4d处理A549肺癌细胞时,其生长受到显著抑制(p＜0.01),并诱导其凋亡。4b,3-(o-硝基苯基)-1-苯基-1H-5-ol(4e)以及4f对A549肺癌细胞生长没有明显影响。结论:1在无血清和FGF-2的条件下,4a(100μM),4b(100μM),4d(100μM)均能显著抑制HUVECs存活。4d(25μM),4f(25μM)显著提高HUVECs存活率。2低浓度的MPD(25μM)抑制去除血清和FGF-2诱导的HUVECs凋亡,而高浓度的MPD(100μM)促进其凋亡。3 MPD(25μM)可能通过下调膜整连蛋白β4和p53以及细胞内ROS水平抑制去除血清和FGF-2诱导的凋亡。4在有血清和FGF-2存在时,MPD对HUVECs形态和存活率没有影响。5 4a(100μM),MPD(50,100μM)均可诱导A549细胞凋亡。