海洋细菌Notoacmeibacter sp.BGMRC2072鉴定及其次级代谢产物研究

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本文研究从广西北海滩涂上附着于红树植物秋茄Kandelia candel上的粗糙滨螺(E:108°50’42",N:21°55’25")分离得到的一株海洋细菌,将其编号为BGMRC2072。通过对菌株的形态特征进行观察,生理生化试验以及16SrDNA序列分析,初步确定菌株的系统发育进化地位,并对该菌株所产红色素的粗提物采用硅胶柱层析初步分离,经高效液相色谱进一步纯化,再结合现代多种波谱学分析方法对此色素进行结构鉴定,最后,通过研究金属离子,温度,酸碱度,氧化剂,还原剂,食品添加剂等对菌株所产红色素的影响,考察该色素稳定性,为将其应用在食品工业生产上提供基础理论依据。试验结果表明:该菌株为一株海洋细菌Notoacmeibacter sp.BGMRC 2072,生长温度范围在15~37℃,最适生长温度为25~32℃,培养温度的变化会影响菌落的颜色,15~20 菌落呈Black red,28℃呈Traffic red,35℃以上呈Purple red,此菌最适生长的pH范围在6~10。菌株的生长需要NaCl的存在,对盐度的耐受范围在1~11%,最适生长盐度为3%。在过氧化氢酶、脲酶和吐温40水解反应中呈阳性,纤维素酶、淀粉水解、吐温20水解、吐温80水解以及氧化酶反应呈阴性。菌株发酵完成后,用氯仿和水(1:3,V/V 萃取,获得色素粗提物为60.98 mg/mL,粗提物经分离纯化得到一个红色单体化合物,纯度为99.3%。经HR-MS分析,确定该色素的分子量[M+H]+为352.2390,结合NMR数据最终确定其结构为庚基灵菌红素(heptylprodigiosin),分子式是 C22H29N3O。该庚基灵菌红素在酸性条件下,Ca2+,Na+,Mg2+,K+等金属离子对庚基灵菌红素溶液起增色作用;低于40℃的条件下,庚基灵菌红素稳定性较好;随着pH的不同庚基灵菌红素的颜色也随之改变,强酸(pH=2,4)条件下,庚基灵菌红素溶液呈紫红色,碱性(pH=8~12)条件下,庚基灵菌红素溶液为橙色,经紫外分光光度计进行全波长扫描后发现最大吸收峰发生偏移;氧化剂(H202)对庚基灵菌红素的稳定性影响较小,庚基灵菌红素在还原剂(Na2S03)中高度敏感,随着浓度的增加在最大吸收波长下(λmax=536 nm)测得的吸光度明显下降,几乎失去染色效果。
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