表面等离子体成像技术用于表皮生长因子受体研究

来源 :清华大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jxy_su261314
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在生命分析技术中,表面等离子共振成像技术(SPRM)以其无标、实时、高分辨的优势占据着重要的地位。表皮生长因子受体作为细胞信号转导的第二大蛋白质家族中的一员,在细胞行为、癌症发展及靶向治疗中发挥着至关重要的作用。在表皮生长因子受体激活后的信号网络中,激活信号的空间和时间动力学决定了细胞信号输出的多样性。因而,发展实时、原位、高分辨的单细胞分析方法对于表皮生长因子受体激活及其下游信号通路的研究尤为重要。论文通过SPRM,在单细胞及亚细胞层面上,对A431细胞中由表皮生长因子介导的表皮生长因子受体激活与其下游信号通路进行了分析研究。在单细胞层面上,表皮生长因子作用于A431细胞,使细胞表现出两相式的SPR响应。本文验证了第一阶段(前600s内)的正SPR响应与表皮生长因子受体激活后的细胞内质量再分布有关,第二阶段的负SPR响应与表皮生长因子诱导的上皮细胞向间叶细胞转化过程相关。同时,SPRM可以有效区分表皮生长因子诱导的A431细胞异质性响应,并检测到表皮生长因子的EC50(半最大浓度效应)为2.5 nM。此外,在亚细胞层面上,利用SPRM技术对两种重要的抑制剂进行了响应抑制分析。结果发现抑制剂AG1478可以抑制来自细胞整个区域的SPR响应,而抑制剂细胞松弛素B强烈抑制来自细胞边缘区域的SPR响应。研究验证了SPRM技术是一种高效的检测表皮生长因子受体激活及其下游信号级联的方法,在由特定分子引发的细胞响应研究中,存在极大的发展潜力。通过SPRM技术可以高分辨成像重要细胞反应过程,提供反应过程中丰富的实时、无标的单细胞和亚细胞信息,有望在药物作用和癌症相关机制研究中发挥重要作用。将SPRM技术与阻抗技术联用形成的表面等离子体共振-阻抗成像方法,可以同时得到反应界面的SPR图像与阻抗图像以实时、无标地反映界面上由于质量、浓度、电荷引起的响应变化。本文中,我们搭建了表面等离子体共振-阻抗成像装置并优化了系统参数,该技术有望在A431细胞的表皮生长因子介导的表皮生长因子受体激活研究中提供更多亚细胞响应信息,加深对此细胞进程的理解。
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