醋酸棉酚对人舌鳞癌Cal-27细胞迁移性及侵袭性作用的研究

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[目的]分析体外应用醋酸棉酚(GAA)对人舌鳞癌Cal-27细胞迁移侵袭影响,探讨醋酸棉酚对人舌鳞癌Cal-27细胞侵袭性作用影响的机制,为临床肿瘤治疗提供相关的理论基础。[方法]1.用二甲基亚砜(DMSO)溶解2.5μmol/L、5.0μmol/L、10.0μmol/L几种浓度的GAA作用于人舌鳞癌Cal-27细胞,并以不加GAA的完全培养基并加入DMSO作为对照组。设置实验时间点为3h、6h、9h、12h、15h、18h、21h、24h。2.通过划痕实验研究GAA对人舌鳞癌Cal-27细胞迁移能力的影响。3.采用Transwell小室实验检测GAA对人舌鳞癌Cal-27细胞侵袭和迁移能力的抑制作用。4.通过qRT-PCR实验检测GAA对人舌鳞癌Cal-27细胞中MMP-2、MMP-9 mRNA表达的影响。5.通过Western blot实验检测GAA对人舌鳞癌Cal-27细胞中MMP-2、MMP-9蛋白表达的影响。[结果]1.细胞划痕实验显示,2.5μmol/L、5.0μmol/L、10.0μmol/L几种浓度GAA对人舌鳞癌Cal-27细胞产生作用以后,可以对人舌鳞癌Cal-27细胞迁移产生抑制作用,基于实验浓度的范围中,迁移量随浓度增加而减少,对照组和实验组的差异有统计学意义(P<0.05),提示GAA有效抑制Cal-27细胞的迁移。2.Transwell实验结果表明:2.5、5、10.0μmol/L浓度下,GAA对人舌鳞癌中Cal-27细胞产生作用之后,对Cal-27细胞的迁移及侵袭能力有一定的抑制作用,且在实验浓度范围内,其迁移及侵袭能力随GAA浓度的增加而减弱。对照组和实验组的差异有统计学意义(P<0.05)3.qRT-PCR实验显示,人舌鳞癌Cal-27 细胞中加入 2.5μmol/L、5.0μmol/L、1O.Oμmol/L 浓度的 GAA 后,结果显示MMP-2、MMP-9 mRNA的表达明显降低,且在实验浓度范围内,GAA浓度越高,MMP-2、MMP-9的mRNA表达越低,对照组和实验组的差异有统计学意义(P<0.05)。4.在 Western-blot 的检测中可知,2.5μmol/L、5.0μmol/L、10.0μmol/浓度下人舌鳞癌Cal-27细胞受到GAA作用之后,基质金属蛋白酶2与基质金属蛋白酶9(MMP-2、MMP-9)蛋白相对表达量降低,且随GAA浓度增高,其降低量明显增加,对照组和实验组的差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]1、GAA可以将人舌鳞癌Cal-27细胞的侵袭性、迁移性降低,基于实验浓度的范围中,随着作用时间增加与GAA的浓度加大,会降低其侵袭性、迁移性。2、一定浓度GAA可以降低人舌鳞癌Cal-27细胞之中MMP-2、MMP-9的mRNA及蛋白表达水平。
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