月季切花(Rosa Hybrida)在花卉市场具有较大的前景和需求量,但是由于月季切花的采摘、加工、运输等环节都会对切花造成失水胁迫,失水胁迫加速了月季切花的衰老过程,进一步影响了切花的寿命和质量,因此提高月季切花对失水胁迫的耐性具有实用性价值。根据对月季切花在失水胁迫过程中花瓣内肽酶的研究,其结果表明失水胁迫显著诱导了丝氨酸蛋白酶的活性。本文在已获得切花月季丝氨酸蛋白酶RhSep1基因序列的基础上,对RhSep1丝氨酸蛋白酶在切花月季失水胁迫过程中的作用进行探索。为了更好的开展后续研究,首先对切花月季丝氨酸蛋白酶RhSep1进行生物信息学分析,全面了解RhSep1的分子量、跨膜结构、疏水、信号肽、同源性,功能位点等可能的理化结构,为研究丝氨酸蛋白酶RhSep1在失水胁迫中的作用起到铺垫。将已获得的RhSep1基因重组到PET28a (+)载体中,构建重组表达载体,并转染到大肠杆菌中进行诱导表达。SDS-PAGE和Western Blot结果表明丝氨酸蛋白酶降解严重,表达条件优化和更换菌种,均不能使目的蛋白明显表达。RhSep1基因相对荧光定量PCR表明RhSep1基因随着月季失水胁迫强度增加,表达也随之上升,但是该蛋白酶并不是失水胁迫诱导所产生。本实验所研究的内容提示了从切花月季花瓣中克隆出的RhSep1蛋白酶参于月季的失水胁迫生理,同时该酶的生化性质及在失水胁迫过程的作用有待进一步研究。