在交通事故和各种暴力案件中，颅脑损伤所致的死亡已成为威胁人们生命的主要原因，也引起了国内外许多专家学者的关注。脑干是机体生命中枢所在地，从理论上讲，颅脑损伤致迅速死亡是由于脑干受到损害，脑干功能的丧失所致。原发性脑干损伤（Primary brain steminjury,PBSI）通常指暴力作用于头部引起脑干为主的损伤，并于伤后立即发生持续时间较长的意识丧失或死亡。神经系统功能的发挥是在其特殊的结构基础上，依赖神经递质的信息传递作用而进行的。脑干损伤后所表现出来的一系列症状及迅速死亡都有其客观的物质基础，如果递质传递过程发生障碍或递质本身出现质或量的异常，必将导致神经系统功能障碍。本研究就是基于以上观点，以动物实验为基础，以期探索脑干损伤后神经递质的合成、代谢等方面的改变，揭示颅脑损伤后脑干功能丧失的机理，同时为法医学鉴定脑干损伤致死提供客观依据。 实验目的：研究颅脑外伤至迅速死亡的Wistar大鼠脑干内神经递质5-HT、SP的改变情况以及合成GABA的酶GAD和GAD-mRNA的表达改变情况，探索其与迅速死亡之间的关系，以揭示颅脑损伤后脑干功能丧失的机理。 实验材料与方法：本实验采用Marmarous自由落体打击装置结合心电监护仪制造Wistar大鼠颅脑损伤模型，得到打击后迅速死亡组大鼠14只，打击后由昏迷状态逐渐转清醒者（存活组）19只，并设正常对照组和死后打击组各6只共计45只。各组大鼠经主动脉插管用4％多聚甲醛灌注固定后，取脑干进行石蜡和冰冻切片。用石蜡切片进行HE染色，并运用免疫组织化学SABC法检测脑干网状结构中缝核一内神经递质5一羟色胺K－HT）的表达改变及P物质“P）和谷氨酸脱接酶（GAD）在中脑黑质中的表达改变情况；在冰冻切片上进行原位杂交实验，用经地高辛标记的寡核着酸探针来检测中脑黑质中的G汕65－W和 GAD67－n：nh＊n的表达改变情况。结合使用图像分析方法和统计学原理对各组的不同染色结果进行对比。 实验结果： 1．死亡组大鼠打击后出现明显的脑干损伤症状及生命体征改变，大体病理解剖见大部分有脑干实质出血，伴不同程度的其它类型颅脑损伤如颅骨骨折、蛛网膜下腔出血等，而其它组未见脑干实质出血、挫伤等改变； 2．HE染色：l）死亡组：大部分可见弥漫性蛛网膜下腔出血、脑组织水肿，脑实质出血；脑干实质细胞水肿，细胞间隙增宽；脑干组织中散在点状出血，微血管充血、管周水肿。2）存活组：大部分也可见蛛网膜下腔出血，微血管充血、周围间隙增宽，脑实质细胞肿胀等镜下改变；但脑干部位却未见有异常改变。引死后打击组及正常对照组脑实质未见异常镜下改变。 3．免疫组织化学染色 1）5－HT：在存活组、死后打击组和正常组大鼠的脑干中仅见到中缝核群的5－HT能神经元胞浆中有5－HT阳性物质沉积。而在实验组 防死亡组）大鼠的脑干中，5－HT阳性物质不仅存在于中缝核群的5－HT能神经元之中，在中缝核群以外的网状结构中的胶质细胞、间质细胞以及微血管壁均可见到5－HT的异常沉积，尤以脑桥下段和延髓上段较为明显。统计学显示5－HT在死亡组大鼠脑干中的表达与另外三组比较有显著性差异o功m。 2）P物质uubstance P，SP）：存活组、死后打击组和正常组大鼠的中脑黑质神经元胞体呈SP ji阳性反应，棕黄色颗粒状的SP阳性产物位于神经元胞浆内，有的偏于一端，有的充满整个胞浆，并沿轴突、树突向四周伸展。死亡组大鼠黑质神经元胞体的阳性显色程度较 ．2——其它三组明显要弱，阳性物质的颗粒性也不明显，轴突、树突模糊，与其它三组有显著性差异0部刀1人 3）谷氨酸脱接酶（Glotamic Acid DeCarbOXylase，GAD人 GAD的免疫组化结果与P物质的染色结果相类似，存活组、死后打击组和正常组大鼠的黑质神经元胞体GAD免疫组化染色呈阳性反应，而死亡组大鼠的黑质神经元胞体GAD免疫组化染色较其它三组明显减弱，呈弱阳性反应，与其它三组比较有显著性差异①刀刀1人 4．原位杂交染色 GAD65．mRNA和 GAD67－M在存活组、死后打击组和正常组大鼠黑质神经元胞体中均表达，胞浆、胞核均呈棕黄色阳性反应，以胞核为主，GAD“－InRN的表达强于GAD 6｝InRNA；而死亡组大鼠黑质中两种 mRNA的表达均减弱，呈弱阳性。经统计分析，与其它三组比较有显著性差异0功＊人 结论 1．头颅暴力致迅速死亡者脑干部位的病理形态学改变提示导致迅速死亡的物质基础是脑干的原发性损伤引起的脑干功能丧失； 2．脑干损伤后，脑干内中缝核及其周围组织中5－HT大量堆积，提示5．HT在脑干损伤至迅速死亡的病理过程中起重要作用；而且，5．HT的这一特征性变化还可用于原发性脑干损伤的法医学鉴定。 3．脑干损伤后中脑黑质中SP表达减弱，可能与脑干损伤后局部血流障碍有关，这一改变可运用于作为法医学鉴定脑干损伤的指标；