第一部分谷氨酸脱羧酶(GAD<,65>)反应性T细胞ELISPOT检测方法的建立 目的：建立糖尿病谷氨酸脱羧酶(GAD<,65>)反应性T细胞ELISPOT检测的优化方案。 方法：选取经典TlDM(T1A)患者、特发TlDM(T1B)患者及健康对照者(Control)各2例，2型糖尿病(T2DM)患者3例；连续梯度离心分离外周单个核细胞(PBMC)；参照U-CyTech公司(荷兰)的ELISPOT标准方案冻存、复苏PBMC及斑点检测，包括分泌IFN-γ的Th1斑点(IFN-γ-Th1)及分泌IL-4的Th2斑点(IL-4-Th2)；观察不同孵育法、孵育时间、刺激抗原、细胞数及新鲜或冻存细胞等对斑点的影响，并对其进行重复性评价。 结论：参照U-CyTech公司的ELISPOT操作规范，建立了适合研究糖尿病GAD65反应性T细胞的ELISPOT的检测方案。 第二部分GAD<,65>反应性T细胞ELISPOT检测在糖尿病发病机制探讨中的应用 目的：比较不同类型糖尿病GAD<,65>反应性T细胞及Thl／Th2平衡的差异，探讨其细胞免疫致病机制。 方法：选取经典T1DM(T1A)患者23例，特发T1DM(T1B)29例，LADA 17例，三组合并为T1DM组(69例)，2型糖尿病(T2DM)28例，T1DM的一级亲属(FR)18例，健康对照(Contr01)16例，并根据起病方式分为急性起病糖尿病组及缓慢起病糖尿病组；ELISPOT检测IFN-γ-Thl、IL-4-Th2及Thl／Th2，1个斑点代表1分泌细胞因子的T细胞；放射配体法检测胰岛自身抗体。 结论：①不同类型糖尿病具有明显不同的IFN-γ-Th1细胞及Th1／Th2平衡，TlDM患者循环中存在明显增多的IFN-γ-Th1细胞及Th1／Th2平衡更偏向Th1，是其细胞水平的发病机制，也是急性起病糖尿病发病的直接原因之一；②绝大多数T2DM及健康者不存在异常的IFN-γ-Th1及Th1／Th2平衡，T细胞免疫异常可用于鉴别TlDM及T2DM；③长病程T1DM患者IFN-γ-Th1细胞及Th1／Th2比值下降，而胰岛素及罗格列酮对IFN-γ-Th1细胞及Th1／Th2具有下调作用趋势。