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目的：下咽癌是头颈部的常见恶性肿瘤，其恶性程度高、预后差，发生机制不明。肿瘤干细胞是近年来的研究热点，在下咽癌方面的研究尚未见报道。本项目拟首先以CD133、CD44、ESA为标志物分选体外培养传代的下咽癌肿瘤细胞，然后将分选后的阳性及阴性肿瘤细胞分别进行体外增殖能力检测，进一步再将其分别注射于NOD/SCID小鼠皮下，观察实验动物肿瘤形成情况，最后采用RNA干扰技术沉默致瘤细胞的相应标志物基因，再次行体外增殖能力和体内致瘤能力实验进行验证，以甄别下咽癌肿瘤干细胞的特异性生物标志。本项目可为下咽癌的发生发展机制及其治疗的研究提供新的思路和策略。 方法:常规培养下咽癌FaDu细胞株，采用流式细胞学技术检测FaDu细胞株中肿瘤细胞CD133、CD44和ESA的表达率，随后采用免疫磁珠分选技术(MACS)对其进行分选,并用流式细胞仪对分选后的细胞纯度予以检测。进一步运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测分选后阳性及阴性细胞的体外增值能力,并将相同数量级（1×106、1×105）分选后的阳性及阴性细胞分别注射于NOD/SCID小鼠皮下，观察其体内致瘤能力的差异。最后采用RNA干扰技术沉默致瘤细胞的相应标志物基因，再次行体外增殖能力和体内致瘤能力实验进行验证，以甄别下咽癌肿瘤干细胞及其相关生物标志。 结果:流式细胞仪检测发现，在下咽癌FaDu细胞株肿瘤细胞中，CD133的表达微量,其表达率为（0.3±0.11）％，ESA+表达率高达(99.2±0.43)%,即几乎所有的肿瘤细胞均表达ESA。下咽癌FaDu细胞株中CD44+细胞占(21.1±1.56)%,免疫磁珠分选后的CD44+细胞纯度达(99.4±0.29)%。体外增殖能力研究显示,CD44+细胞增殖速度明显快于CD44-细胞。NOD/SCID鼠体内致瘤实验结果显示,相同数量级的CD44+细胞致瘤率明显高于CD44-细胞致瘤率（Fisher精确概率法，P<0.05），且CD44+细胞组比CD44-细胞组更早成瘤，潜伏期明显为短，CD44+细胞组所致肿瘤体积（平均为2017.81±538.50mm3）亦较CD44-细胞组所致肿瘤体积（平均为1153.25±503.18mm3）明显为大（t=2.67，P<0.05）。采用RNA干扰技术沉默CD44基因后，体外增殖能力研究显示，RNA干扰组细胞增值速度明显低于空白对照组，NOD/SCID鼠体内致瘤实验结果显示,相同数量级的RNA干扰组细胞致瘤率明显低于空白对照组，差异有统计学意义（Fisher精确概率法，P<0.05）；同时，RNA干扰组比空白对照组更晚成瘤，潜伏期明显为长，RNA干扰组所致肿瘤平均体积亦明显小于空白对照组，两组间差异有统计学意义（t=3.47，P<0.05）。 结论:在所检测的三种分子标志物CD133、CD44和ESA中，仅CD44具有作为筛选下咽癌肿瘤干细胞重要分子标记物的可能。为深入研究CD44作为筛选下咽癌肿瘤干细胞的分子标记物价值，本项目一方面将免疫磁珠分选技术分选出的CD44+肿瘤细胞致瘤性进行研究，发现下咽癌中CD44+细胞比CD44-细胞具有更强的体外增殖能力和体内致瘤能力，从正面提示了CD44+具备下咽癌肿瘤干细胞特异性分子标记物的某些特性。另一方面通过RNA干扰技术有效沉默下咽癌肿瘤细胞目的基因后，比较该基因沉默前后其致瘤性的改变，结果发现 CD44基因沉默后肿瘤细胞的体外增殖能力及体内致瘤能力较CD44基因沉默前明显为弱，进一步从反面证实了CD44+肿瘤细胞具有下咽癌肿瘤干细胞的相关特性。本研究结果显示，CD44为筛选和鉴定下咽癌肿瘤干细胞的一个重要分子标记物。