研究背景与目的胱天蛋白募集域蛋白9（caspase recruitment domain-containg protein,CARD9）为CARD家族中的一员,是迄今为止发现的最重要的免疫衔接蛋白之一。研究已证实CARD9蛋白的功能异常与多种疾病有关,如炎症性肠病、心血管疾病、肿瘤等。近年来,研究发现CARD9基因突变与真菌易感相关,临床上在真菌病患者中越来越多的CARD9基因突变被发现和报道。CARD9在真菌感染中的作用已成为真菌与宿主免疫研究的一个热点问题,但关于其确切致病机制目前还知之甚少。因此,本研究旨在收集复发难治性真菌病患者以及严重真菌感染患者,对这些患者进行CARD9基因突变检测,对筛查阳性的患者进行体外抗真菌免疫特点的研究,利用计算生物学的方法研究临床发现的突变对CARD9蛋白参与的抗真菌免疫通路的影响以及构建CARD9蛋白的三维立体结构,以进一步认识CARD9基因突变致真菌易感的机制。资料与方法本研究收集既往经治的真菌感染患者,患者多具备病程迁延、缺乏真菌病的常见诱因等特点。利用二代测序技术筛查患者CARD9基因突变情况。对筛查阳性的患者提取其外周血单个核细胞及中性粒细胞进行抗真菌免疫功能研究。利用分子动力学模拟技术研究目前已发现的CARD9基因临床突变对CARD结构域空间构象的影响,利用计算机模拟CARD9蛋白全长的三维空间构象以认识其结构特点,揭示突变致病机制。结果1.本研究共收集6例既往诊治并长期随访的真菌病患者,二代测序筛查两例患者CARD9基因存在致病性突变。2.免疫功能研究发现携带CARD9基因复合杂合突变（c.68C>A,c.820dup G）的复发性念珠菌淋巴结炎患者,在体外与念珠菌共培养培养条件下,其外周血单个核细胞分泌多种细胞因子的水平下降,中性粒细胞杀伤白念珠菌的能力降低。3.通过分子动力学模拟发现CARD9蛋白纯合突变R18W、R35Q和R57H对CARD9-CARD与BCL10复合体的的结构均会产生影响。4.通过从头预测法获得了CARD9蛋白全长的三维立体结构。结论本研究发现,CARD9基因复合杂合突变（c.68C>A,c.820dup G）可影响患者抗白念珠菌免疫过程中各细胞因子的水平及中性粒细胞的功能,造成患者病情反复。本研究创新性的运用蛋白结构生物学和计算生物学的方法从蛋白结构层面解释了突变对复合体结构的影响并构建了CARD9蛋白全长的三维空间结构,以期为后续研究奠定基础。