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【目的】通过测定卵巢过度刺激综合征(OHSS)病人及非OHSS病人注射绒毛膜促性腺激素(HCG)日、胚胎移植日血清及取卵日卵泡液中血管内皮生长因子(VEGF)的含量,以及测定取卵日颗粒细胞VEGF mRNA的表达,揭示VEGF与OHSS发病的相关性,探讨VEGF在OHSS发病过程中的作用及其机理,为OHSS的临床诊断及预防提供实验依据。 【方法】酶联免疫吸附试验(ELISA)测定14例中、重度OHSS病人及22例非OHSS病人注射HCG日血清,胚胎移植日血清,及取卵日卵泡液内VEGF浓度,结果用(?)±S表示,统计学处理选用t检验;半定量反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术检测取卵日颗粒细胞VEGF mRNA的表达。常规提取颗粒细胞总RNA,测定其在260nm处吸光值。根据公式RNA含量=A260×40×稀释倍数/1000计算样品RNA含量。逆转录(RT)合成cDNA,反应体系20UL包括:MgCL24uL,10×RNA PCR缓冲液2ul,dNTP混合液2ul,RNA酶抑制物0.5ul,随机引物1ul,逆转录酶1ul,样品RNA 1ug。反应条件:30℃10min,42℃30min,99℃5min,5℃5min。反应之后加入MgCL26uL,10×RNA PCR缓冲液8ul,双蒸水61.5ul,Taq DNA聚合酶0.5ut,VEGF特异性上游及下游引物各1ul,β-actin特异性上游及下游引物各1ul。PCR扩增条件:变性94℃1min,退火62℃1min,延伸72℃1min,共28个循环,最后72℃延伸7min。1.5%琼脂糖凝胶电泳显示结 中文摘要果,数字图像分析仪进行结果分析。将VEGF与p-actin各自的DNA条带的面积比,作为VEGF mRNA水平的参数,对 PCR产物进行相对定量分析。 【实验结果】l、OHSS组与非OHSS组血清VEGF浓度,注射HCG日分别为102.5士40.8,90.23士34.62gg加1,两组相比,P>0.05,未见显著性差异;胚胎移植日分别为 150.93土59.gi,104.18士20.76Pg/。l,两组相比,P<0.of,有显著性差异;卵泡液分别为782.86土136.87,362.5士231.85pg/ml,两组相比,P<0、05,有显著性差异。2、HCG注射日与胚胎移植日,OHSS组血清VEGF浓度分别为102.5士40.80、150.93士59.giPg/gi,两组相比,P<0.05,有显著性差异;非OHSS组血清VEGF浓度分别为90.23土34.62,104.18士20.76 pg/ml,两组相比,P>0.05,无显著性差异。3、OHSS组与非OHSS组卵泡液中VEGF浓度均高于血清数倍。(782.86 1136.87对 150.93 i59.91、102.5 土40.80,362.50 士231.85对 104.18 土20.76、90.23土 34.62 Pg砌1)4、半定量RT-PCR结果显示,OHSS组和非OHSS组VEGF带/p ac亡in带分别为:0.54士0.24与0.27士0.12。两组相比,P (.of,OHSS组VEGF mRNA表达明显增强。 【结论】10HSS组较非OHSS组胚胎移植日血清及取卵日卵泡液中VEGF浓度明显升高,颗粒细胞中VEGF。RNA表达显著增强。胚胎移植日血清及取卵日卵泡液中VEGF浓度可作为OHSS的预测指标。2 OHSS组注射HCG后血清VEGF浓度显著升高,而非OHSS组VEGF未见显著性变化。提示注射HCG后血清VEGF浓度显著性升高是OHSS发生的重要指标。3卵泡液中VEGF浓度高于血清数倍,提示在OHSS发病过程中,在卵巢内VEGF表达增强。4 HCG注射日,血清VEGF浓度OHSS组与非OHSS组间未见显著性差异。表明此时VEGF血清浓度不能作为 OHSS的预测指标。