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背景肺动脉高压(pulmonaryarterialhypertension,PAH)是一种临床进展性疾病,主要表现为肺动脉阻力进行增高进而导致右心衰,死亡率高;病理特征为内皮细胞及血管平滑肌细胞增殖,中膜肥厚,原位血栓形成。目前治疗PAH的药物主要包括钙离子拮抗剂、前列环素类药物、内皮素受体阻滞剂、磷酸二酯酶抑制剂-5等,这些药物主要通过神经内分泌机制阻断肺动脉收缩、扩张肺动脉发挥其治疗作用,虽然对早期患者可改善其症状,但不能逆转其病程,疗效有限,且价格昂贵。因此寻找疗效确切,价格低廉,适合我国国情的药物有极其重要的意义。青蒿素(artemisinine,Art)属倍半萜内酯化合物,是一种高效低毒的抗疟药物,其衍生物主要有双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)、青蒿琥酯(artesunate)、蒿甲醚(artemether)和蒿乙醚(arteether)等,临床上主要用于治疗疟疾。新近研究表明,除抗疟作用外,青蒿素还具有抗炎、抗肿瘤、放射增敏、抗菌增敏、抗组织纤维化等作用。青蒿素能否通过抗纤维化或其他机制,抑制肺动脉高压过程中的肺动脉重构,进而对肺动脉高压产生保护作用。目前,这方面的研究鲜见文献报道。双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)是青蒿素在体内的主要代谢物,与青蒿素比较,DHA具有水溶性更好,生物利用度更高,抗疟效力更强的特点。本实验拟通过野百合碱建立大鼠肺动脉高压模型,应用DHA对大鼠肺动脉高压进行干预,探讨DHA对肺高压大鼠血流动力学及肺血管重构的影响;探讨DHA对MCT诱导的肺动脉高压大鼠右室心肌细胞超微结构及右室心肌细胞凋亡的影响;探讨DHA对野百合碱诱导肺动脉高压大鼠VEGF、ICAM-1、表达的影响。研究DHA对肺动脉高压大鼠是否具有保护作用及其作用机制。目的观察双氢青蒿素对野百合碱诱导肺动脉高压大鼠肺动脉压力的作用,探讨双氢青蒿素对野百合碱肺动脉高压大鼠模型的肺动脉重构的影响及相关机制。方法1双氢青蒿素对肺高压大鼠血流动力学及肺血管重构的影响将30只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、肺动脉高压模型组和双氢青蒿素干预组,每组10只。肺动脉高压模型组和双氢青蒿素干预组给予野百合碱60mg/kg皮下注射,建立大鼠肺动脉高压模型,正常对照组给予等剂量的生理盐水(60mg/kg,约6ml/kg)皮下注射。3周后,干预组每天给予双氢青蒿素(溶于植物油中)60mg/kg/d灌胃,其余两组给予等剂量的淀粉溶液灌胃,持续3周后进行血流动力学检测及形态学观察;以导管法观察其平均肺动脉压(mPAP)、组织病理学检查观察新生内膜形成、计算右心室肥大指数即右心室/左心室+室间隔(RV/LV+S)的变化;评价肺动脉管壁厚度和管腔面积;免疫组化染色计算肺小动脉无肌性血管肌化程度、肺动脉平滑肌细胞的增殖度、VG染色评价新生内膜细胞的增殖度;天狼猩红染色评价心肌胶原沉积。2双氢青蒿素对野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠右室心肌细胞超微结构及右室心肌细胞凋亡的影响将30只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、肺动脉高压模型组和双氢青蒿素干预组,每组10只,动物模型的制备及分组同第一部分。游离右心室,取右室游离壁中部1mm~3心肌标本2~3块,立即行2.5%戊二醛-1%锇酸双固定;常规乙醇、丙酮逐级脱水;环氧树脂包埋,超薄切片机切片,醋酸双氧铀及枸橼酸铅双重染色,以H-500透射电镜观察并拍照以观察MCT诱导的大鼠右室心肌细胞的超微结构的改变。采用TUNEL法检测,参照In situ Cell Death Dection,POD Kit说明操作。常规石蜡切片,脱蜡至水;3%甲醇过氧化氢阻断POD;蛋白酶K 37℃孵育,加入TUNEL液(1:9);POD转换液;DAB显色,苏木素复染;晾干,封片,镜检。光学显微镜观察并计算右室心肌细胞凋亡指数。3.双氢青蒿素对野百合碱诱导肺动脉高压大鼠VEGF、ICAM-1表达的影响将30只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、肺动脉高压模型组和双氢青蒿素干预组,每组10只,动物模型的制备及分组同第一部分。采用放射免疫分析法测定血液中VEGF、ICAM-1等因子的含量;应用RT-PCR及Western blot技术检测肺动脉中VEGF、ICAM-1 mRNA及蛋白质的表达。结果1、野百合碱皮下注射可引起大鼠严重肺高压形成,并出现新生内膜,肺动脉高压组mPAP、右心室重量、腺泡内肺小动脉肌化程度、肺小动脉中膜厚度百分比、肺小动脉新生内膜增殖度较其它各组显著升高(P<0.01)。经双氢青蒿素干预后,mPAP有所下降、右室肥大指数、肺小动脉肌化程度、肺小动脉中膜厚度及新生内膜增殖度均有所减轻(P<0.05)。2、各实验组右室心肌细胞超微结构所见:正常对照组肌丝排列整齐,肌小节Z线、M线清晰可见,心肌细胞核膜清晰,核结构完整,线粒体饱满,嵴完整。模型组肌丝大量断裂、溶解,线粒体肿胀,部分嵴断裂并伴有明显空泡样变性;心肌细胞胞质浓缩、染色质边集浓聚;双氢青蒿素干预组心肌超微结构损伤较模型组为轻,肌丝排列尚整齐,肌节结构基本清晰,线粒体轻度肿胀。经TUNEL法检测,青蒿素干预组,心肌细胞凋亡程度较模型组有所减轻(P<0.05)。3、各组大鼠血清中均可测到不同浓度的VEGF、ICAM-1,与模型组相比,双氢青蒿素干预组内VEGF、ICAM-1的浓度明显低于模型组(P<0.05)。各组肺动脉内均可见VEGF、ICAM-1 mRNA及蛋白质的表达。与对照组相比,模型组内VEGF、ICAM-1 mRNA及蛋白质的表达明显高于对照组(P<0.01),差异有显著统计学意义。干预组内VEGF、ICAM-1 mRNA及蛋白质的表达高于对照组(P<0.01),差异有统计学意义。与肺动脉高压组相比,干预组内VEGF、ICAM-1 mRNA及蛋白质的表达明显低于肺动脉高压组(P<0.05),差异有显著统计学意义。结论1、双氢青蒿素可直接降低MCT诱导的肺动脉高压模型大鼠的肺动脉压、明显抑制其肺血管构型重建、减轻右心室肥厚。2、双氢青蒿素可抑制或减轻MCT肺高压大鼠的心肌细胞凋亡,减轻心肌细胞超微结构的损伤。3、双氢青蒿素可以直接抑制肺动脉内VEGF、ICAM-1mRNA及其蛋白质的表达,进而缓解或逆转肺动脉重构。