【摘 要】
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研究背景：流行病学资料表明，长期服用吲哚美辛(Indomethacin，IN)等非甾体类抗炎药(Nonsteroidalanti-inflammatory drugs，NASIDs)可有效预防结肠癌的发生和发展。以往的研究表明，I
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研究背景：流行病学资料表明，长期服用吲哚美辛(Indomethacin，IN)等非甾体类抗炎药(Nonsteroidalanti-inflammatory drugs，NASIDs)可有效预防结肠癌的发生和发展。以往的研究表明，IN通过非选择性抑制环氧化酶(COX，cyclooxygenase)途径发挥抗肿瘤作用。随着研究的深入，IN通过非COX依赖途径抗肿瘤的作用得以日益凸现，如NF-KB的激活、RAS信号的转导、端粒酶活性的抑制等。我们的前期研究利用高通量、大规模的功能蛋白质组学技术，动态研究IN处理组和未处理组HCT116细胞的蛋白质变化，在国际上首次建立了IN处理组和未处理组人结肠癌HCT116细胞系蛋白质双向凝胶电泳(2-DE)表达图谱，并应用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定了20个差异蛋白质点，发现IN可通过下调Bc1-2相关蛋白A1(Bf1-1)、Wntl信号通路诱导蛋白-1(WISP-1)及细胞增殖核抗原(PCNA)等非COX途径抑制HCT116细胞增殖并诱导其凋亡。本次研究在前期工作的基础上，用吲哚美辛作用于HCT116细胞(既不表达COX-l也不表达COX-2)，运用实时荧光定量PCR技术和Western Blot方法，分别从mRNA和蛋白质水平，探讨Bf1-1、WISP1-1和PCNA在IN抗结肠癌的非COX依赖途径中的作用。
目的：通过分析IN对人结肠癌I_{CTll6细胞Bfl-1、WISP-1及PCNA表达的影响，探讨其抗结肠癌的非COX途径，验证前期利用蛋白质组学技术发现的IN处理HCT116组和未处理组之间有意义的差异蛋白质点。
方法：体外培养人结肠癌HCTll6细胞，采用实时荧光定量PCR和Western Blot技术，检测IN处理组和未处理组HCT116细胞Bfl-1、WISP-1和PCNA mRNA及蛋白质的表达。
1．体外培养人结肠癌HCT116细胞，将细胞分为实验组和对照组。实验组：用IN的OC<,50>(316Llmol／L)处理对数生长期HCT116细胞，于37℃、5％C0<,2>孵箱中孵育48小时后收集。对照组为IN未处理的HCT116细胞。
2．对IN处理组和未处理组HCT116细胞进行总RNA的抽提和浓度的测定，采用实时荧光定量PCR技术检测两组Bfl-1、WISP-1和PCNAmRNA的表达。
3．对IN处理组和未处理组HCT116细胞进行总蛋白质的提取和浓度测定，采用Western Blot技术检测两组Bfl-1、WISP-1和PCNA蛋白质的表达，并在凝胶成像系统上采集图像进行半定量分析。
结果：1．IN处理组HCT116细胞Bfl-1、WISP-1和PCNA mRNA的表达水平分别下降34.19％、36.54％和16.83％，与未处理组相比，差异有显著性(P<0.01)。
2．IN处理组}tCT116细胞Bfl-1、WISP-1和PCNA蛋白质的表达水平分别下降45.79％、55.41％和23.73％，与未处理组相比，差异有显著性(P<0.05)。
结论：IN可导致Bfl-1、WISP-1及PCNA mRNA表达的下调；IN可导致Bfl-I、WISP-I及PCNA蛋白质表达的下调；验证了前期利用蛋白质组学技术发现的IN处理组与未处理组HCT116细胞之间有意义的差异蛋白质点。提示IN可通过Bfl-i、WISP-l和PCNA等非COX途径抑制HCT116细胞增殖并诱导其调亡。
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