论文部分内容阅读
副溶血性弧菌是一种革兰氏阴性的嗜盐性食源性致病菌,隶属弧菌科中的弧菌属,广泛存在于海水、海底沉积物等环境和虾、蟹、贝类等各种海产品中。是引起沿海地区食物中毒爆发的常见的病原菌之一,能够引起伤口感染、败血症、腹泻、头痛和急性胃肠炎等疾病。副溶血性弧菌食物中毒事件常因食用被污染的生鲜、未充分煮熟或被交叉污染的水产品引起。在沿海地区温度较高月份极易引发由副溶血性弧菌引起的集体性食物中毒事件,且已超过沙门氏菌引起的食物中毒事件,由此引起全球对此食源性致病菌副溶血性弧菌的极大关注。抗生素通常被认为是治疗此类疾病的良好药剂,但随着抗生素的大量使用该菌的耐药株不断增加,而耐药性的问题日益严重,尤其是食源性致病菌产生耐药性后,会给临床治疗带来极大的困难,对人类健康造成严重危害。对分离的副溶血性弧菌菌株进行耐药性分析,能够为降低药物残留及食源性疾病的控制提供参考依据。本文从上海市水产品中致病性副溶血性弧菌的普查、耐药性和敏感性副溶血性弧菌的生长特性比较,耐药性致病性副溶血性弧菌在南美白对虾中的预测模型建立等几个方面对耐药性致病性副溶血性弧菌的生长特性展开了系统的研究。具体研究如下: 第一部分:改良K-B法用于副溶血性弧菌耐药性检测 K-B纸片法是最为广泛的细菌药敏测定方法之一,本文针对常见的食源性致病菌副溶血性弧菌,对K-B纸片法进行优化和改良。通过建立OD-菌数对应公式以代替传统的麦氏比浊方法,并根据抑菌圈判别结果的差异,选择了标准一次性平皿(9 cm×9 cm),同时对比3种不同的涂布方法,得出定量300μ L棉拭子涂布方法变异系数(CV)最小,最后通过8株野生副溶血性弧菌的耐药性检测,表明改良K-B法与传统方法的实验结果基本保持一致。从而建立了一种更高效、更快捷的细菌耐药性测量方法,可应用于副溶血性弧菌的耐药性检测。 第二部分:上海市售水产品中致病性副溶血性弧菌的耐药性及其分子分型 副溶血性弧菌在中国属于暴发严重的食源性致病菌之一,它能够引起急性肠胃炎。本文的目的是调查致病性副溶血性弧菌的耐药性及其基因型关系。我们于2011年3月到2012年12月从上海零售市场中进行样品的采集。共采集了352份水产样品品,其中248份虾样品,86份贝类和18份鱼类,分离鉴定获得41株致病性副溶血性弧菌,对其进行耐药性的测定和分子分型的分析。在副溶显色培养基初筛后,挑选的菌株进一步通过PCR扩增tlh,tdh,trh基因验证,最终获得41株tdh阳性的副溶血性弧菌。另外,致病性菌株O3:K6(Vp2)和ATCC33847(Vp1)作为对照。耐药性检测结果显示,这些致病性菌株均对氯霉素敏感,14.63%对阿米卡星具有抗性,对阿莫西林-克拉维酸,庆大霉素,环丙沙星,左氧氟沙星具有不同程度的抗性。通过ERIC-PCR(肠杆菌基因间重复序列聚合酶链式反应)分析将这些致病性菌株分成6种图谱型。总之,副溶血性弧菌是在水产市场中常见的致病菌,并且有些的菌株是致病性的并且耐药的菌株,这可能对人类健康带来潜在的风险。 第三部分:不同耐药性致病副溶血性弧菌的生长特性比较研究 用K-B纸片扩散法分析了8株致病性副溶血性弧菌菌株对10种抗生素的耐药性,发现6株菌株具有耐药性,其中,1株耐3种抗生素,1株耐2种抗生素,其余4株耐1种抗生素。比较了20、25、37℃下这8株菌株在TSB(含3%NaCl,pH8.0)中的生长特性。通过Bioscreen全自动微生物生长曲线分析仪建立了这8株菌的一级生长模型,并比较其最大比生长速率(μmax),延滞期(λ)及最大生长量(a)。同时比较了这8株菌的ERIC-PCR图谱的差异性。结果显示,不同耐药性致病性副溶血性弧菌菌株的生长参数存在一定的差异性,但是菌株的各个生长参数的大小与菌株的耐药性之间没有明显的对应关系。并且发现ERIC-PCR图谱与菌株的耐药性之间也没有明显的对应关系。本研究为耐药性致病副溶血性弧菌的风险评估提供参考依据。 第四部分:三株不同的耐药性致病副溶血性弧菌在南美白对虾中一级预测模型的建立 为了探讨不同耐药性致病副溶血性弧菌在南美白对虾中的生长动力学参数的差异。测定了4℃、7℃、10℃、15℃、20℃、25℃和30℃条件下三株不同耐药性致病性副溶血性弧菌:Vp18(耐6种抗生素)、Vp57(耐3种抗生素)、Vp43(耐1种抗生素)在南美白对虾中的生长曲线。采用了一级模型:生长模型(三阶段线性模型)和失活模型(线性模型)进行拟合,经过origin8.0软件拟合,结果显示,拟合的R2均在0.9以上(4℃Vp43的线性拟合R2为0.87),表明拟合效果良好。对获得的不同温度下的生长参数进行比较,结果表明,在15℃~30℃的情况下,这三株耐药性致病性副溶血性弧菌的最大比生长速率都是随温度的升高而增大;在10℃条件下,这三株菌的生长趋势不同于前几个温度,起初有所降低,而40h之后却呈现了生长的趋势;在7℃和4℃的时候,三株菌株都呈现死亡情况。综合7个温度下菌株的生长变化情况,这三株菌耐药性的高低与生长速率的大小没有明显的对应关系。