论文部分内容阅读
目的:中药柴胡疏散退热功效显著,常配伍用于解表散热之症,而机体发热与炎症密切相关。现代药理研究证实柴胡具有明显抗炎作用,但柴胡基源复杂、产地、炮制方式等因素均可导致质量差异,进而影响柴胡及其在复方中的抗炎活性。因此,有必要对柴胡的抗炎谱效关系进行研究,筛选得到具有抗炎作用的柴胡药效物质成分,进一步建立该类成分的质量评价方法控制柴胡质量。方法:1.以不同产地的20批柴胡为研究对象,建立柴胡HPLC-DAD指纹图谱质量评价方法,获得各产地柴胡的指纹图谱信息,并采用HPLC-Q-TOF-MS对共有峰进行成分归属;2.采用脂多糖（LPS）诱导RAW264.7细胞炎症模型,筛选得到与柴胡体外抗炎活性相关的NO、IL-1β、IL-6和TNF-α炎症因子水平;通过多元线性回归及灰色关联度分析构建柴胡抗炎的“谱效关系”,筛选出与柴胡体外抗炎活性相关的特征峰;3.建立柴胡样品中抗炎活性成分SSa、SSe、SSd、SSb2、SSb1的HPLC双波长含量测定方法,利用该方法对不同产地20批柴胡样品中5种抗炎活性成分含量进行测定与评价。结果:1.运用相似度软件分析确定了13个共有峰;发现不同产地柴胡之间的相似度在0.108-0.98之间,说明柴胡样品质量存在明显差异,可能是不同基源、不同产地的生长环境及管理方式不同而引起的差异。通过主成分分析结果表明有4个主成分,三者方差累计贡献率为84.707%,其中三种成分分别为SSa、SSd和F11。采用HPLC-Q-TOF-MS对其13个共有峰进行归属,鉴定出12个化学成分,其中9个三萜皂苷类,1个黄酮类化合物,2个挥发油类成分。其中F1为异槲皮苷、F2为SSc、F3为SSf、F4为SSa、F5为SSe、F6为3’-乙酰基SSa、F7为SSd、F8为3’-乙酰基SSd、F10为亚油酸甲酯、F11为亚油酸、F12为SSb2、F13为SSb1。结果表明本方法能够对柴胡中共有峰化学成分进行鉴定。2.采用LPS刺激RAW264.7建立体外细胞炎症模型,以炎症因子NO、IL-1β、IL-6和TNF-α含量为检测指标,对不同产地20批柴胡药材进行体外抗炎活性研究。并进一步采用多元线性回归分析及灰色关联度分析将20批柴胡指纹图谱中共有峰的峰面积数据与柴胡的体外抗炎活性实验结果进行分析。结果表明不同产地柴胡样品体外抗炎活性存在显著差异,其中内蒙古海拉尔、青海、陕西省澄城县产的柴胡体外抗炎活性较强;四川、甘肃省平凉县、甘肃省康乐县的柴胡体外抗炎活性较差。筛选出柴胡可能发挥抗炎活性的成分有SSa、SSe、3’-乙酰基-SSa、SSd、SSb2、SSb1及F9。3.建立了柴胡中5种抗炎活性成分的HPLC双波长含量测定方法。选取SSa、SSe、SSd、SSb2及SSb1为检测指标。结果表明不同产地、栽培品与野生品之间存在明显差异。若以5种皂苷总量来评价柴胡抗炎活性的优劣,其中产自青海栽培品的较好,陕西省澄城县次之,甘肃省康乐县较差。为柴胡体外抗炎成分的确定提供实验依据,该方法以抗炎活性为基础对柴胡质量进行控制与评价。结论:1.通过柴胡体外抗炎谱效关系研究,筛选出柴胡发挥体外抗炎药效的活性成分。2.针对筛选得到的活性成分,建立柴胡中5种成分的HPLC双波长多指标成分含量测定方法,为柴胡抗炎活性成分进行质量控制与评价提供依据。