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[背景与目的]胶质母细胞瘤(GBM)是成人颅内最常见且具有高度侵袭性的恶性肿瘤。依鲁替尼(ibrutinib)作为一种布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂,已经发现在多种肿瘤中具有抗癌效应。在本篇研究中,我们重点探讨依鲁替尼在GBM中发挥抗癌作用以及其诱导自噬的机制研究。[方法](1)不同浓度和时间段,用依鲁替尼处理GBM细胞系,CCK8检测细胞活力。(2)平板克隆形成实验检测细胞长时间的增殖能力。(3)EdU实验检测LN229和U87细胞增殖能力。(4)流式细胞实验检测依鲁替尼对细胞周期和凋亡影响。(5)Western Blot实验检测不同处理组细胞以及组织蛋白表达情况。(6)影细胞划痕实验和Transwell实验检测依鲁替尼对细胞迁徙能力响。(7)电镜观察细胞内自噬结构。(8)免疫荧光检测不同处理组的蛋白变化情况。(9)通过转染小干扰RNA(siAtg7)敲除Atg7。(10)通过转染持续激活Akt(CA-Akt)的质粒过表达Akt活性蛋白。(11)在裸鼠成瘤实验中,观察不同处理组的成瘤能力。(12)免疫组化观察成瘤组织中相关蛋白的变化。[结果]CCK8实验结果显示,依鲁替尼处理后的GBM细胞,活力值随着药物浓度或时间的升高而降低,细胞克隆形成个数减少。EdU实验中,依鲁替尼处理的GBM细胞增殖能力明显减少。为进一步探讨细胞增殖的机制,细胞流式结果显示:随着依鲁替尼浓度升高,细胞G1期阻滞明显和凋亡增加。细胞划痕实验和Transwell实验结果显示,在依鲁替尼处理的GBM细胞中,细胞迁徙能力明显降低。电镜实验,免疫荧光实验和Western Blot实验结果均显示,依鲁替尼诱导GBM细胞自噬生成。通过转染CA-Akt质粒提高Akt活性,抑制自噬相关蛋白LC3□/LC3 □的比率。而加入Akt抑制剂LY294002后使LC3 □/LC3 □比率升高,表明依鲁替尼可以通过Akt/mTOR通路诱导自噬产生。为进一步探讨自噬功能,加入3甲基巯嘌呤(3MA)和敲除Atg7抑制细胞自噬。CCK8和流式细胞检测,依鲁替尼诱导的GBM细胞活力进一步下调和凋亡增加。体内实验中,依鲁替尼联合3MA后,成瘤的体积小于单独用药组。免疫组化和组织蛋白Western Blot实验显示依鲁替尼联合3MA抑制p-Akt的磷酸化和自噬。细胞Ki67染色比单独使用依鲁替尼组减少更加明显,表明抑制自噬后依鲁替尼抑制肿瘤增殖能力下降。[结论]依鲁替尼作为一种BTK抑制剂,可以靶向作用Akt/mTOR通路抑制GBM细胞的增殖和迁徙,同时诱导细胞凋亡和自噬。体内体外实验,证明抑制自噬增加依鲁替尼对GBM的抗肿瘤活性。本实验为胶质瘤的新药的开发,耐药机制的研究以及优化治疗方案提供了新的思路和理论依据。