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粉虱传双生病毒(Whitefly-transmitted geminivirus,WTGs)是一类单链环状DNA植物病毒。WTGs寄主范围广,重组变异快,严重威胁着全球热带、亚热带地区农作物。我国南方省份都相继检测到该类病毒,并且其危害有日益加重的趋势。本文对采自云南各地不同时期,不同寄主上WTGs的发生、分布及其遗传多样性进行了分析,并建立了农杆菌介导的侵染性克隆体系。
用双生病毒简并引物PA和PB对各地采集的样品进行了PCR检测,共有47个样品扩增出约500 bp的目的条带。克隆测序后发现,这些样品中均检测到WrGs,且初步确定为9种不同病毒。在此基础上进一步扩增并克隆、测定了37个分离物DNA-A全序列,序列分析表明云南WTOs具有丰富的种类多样性,它们分属于11种病毒,而中国番茄黄化曲叶病毒是云南WTGs的优势种。
对其中15个中国番茄黄化曲叶病毒分离物进行了种内遗传多样性分析,它们之间的同源性在88.7%~99.9%之间。基于DNA-A核苷酸全序列和病毒外壳蛋白氨基酸序列构建的系统进化分析表明,该病毒具有明显的地理分布差异,外壳蛋白的系统进化结构还表现出寄主差异。
对这11种病毒共37个分离物进行种间的多样性分析。分别构建了DNA-A全序列、外壳蛋白和复制相关蛋白的系统进化树。三者的系统进化结构不一致,推测是病毒的不同编码框,所受选择压力不同,导致不同的变异及种闻的重组。从地理区域的差异看,丽江和大理的病毒种类单一且亲缘关系较近;楚雄病毒种类多,以TYLCCNV为优势种;德宏的病毒种类上与其它地区存在较大差异,且表现出明显的寄主相关性,其中甘薯曲叶病毒属于新世界双生病毒。
在红河地区分离到云南辣椒曲叶病毒,并从1个辣椒样品、3番茄样品克隆了该病毒的全长序列。序列比对表明,他们之间的同源性在99.3%以上,但与中国番茄黄化曲叶病毒同源性最高,仅为87.3%,根据双生病毒划分标准,属于菜豆金色黄花叶病毒属的一个新种。
构建了野茼蒿黄脉病毒DNA-A的侵染性克隆。DNA-A单独接种以及DNA-A和赛葵黄脉病毒卫星分子DNA β混合接种均可系统侵染心叶烟、普通烟和番茄,并诱导产生黄化、卷曲等典型症状。