表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG对人肝癌细胞株HepG2体外放疗的影响

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目的:研究相同剂量EGCG联合不同剂量放疗对HepG2中hTERT基因表达和细胞凋亡的影响,探讨EGCG成为放疗增敏剂的可能性。方法:用MTT法检测不同浓度EGCG(10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)对HepG2细胞增殖的影响;用荧光显微镜检测不同浓度EGCG做HepG2细胞凋亡实验;用实时荧光定量PCR检测不同浓度EGCG对HepG2中hTERT基因的表达的影响,从而找到合适的EGCG剂量用于观察其体外放疗的实验。用流式细胞仪检测不同剂量放疗(0GY、2GY、4GY、6GY)联合EGCG和不联合EGCG治疗后HepG2细胞凋亡率;用实时荧光定量PCR检测不同剂量放疗(0GY、2GY、4GY、6GY)联合EGCG和不联合EGCG治疗后,HepG2中hTERT基因的表达。放疗用直线加速器6MVX线。结果:MTT检测结果显示: EGCG抑制HepG2细胞生长,呈浓度依赖关系(R2=0.9558,P<0.05)。荧光显微镜结果显示:EGCG促进HepG2细胞的凋亡,呈浓度依赖关系。实时荧光定量PCR结果显示:10μmol/L组与0μmol/L组比,差异明显(P<0.01)且对hTERT呈上调作用;25μmol/L组与0μmol/L相比差异不明显(P>0.05),50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L组与0μmol/L组相比,均有明显差异(P<0.01)且对hTERT呈下调作用。根据以上实验结果,选择25μmol/LEGCG进行体外放疗的实验。实时荧光定量PCR结果显示:单用25μmol/LEGCG对HepG2中的hTERT基因并无显著影响,而经2Gy、4Gy、6Gy放射治疗后HepG2中的hTERT基因均有下调作用。0GY组与2Gy、4Gy、6Gy组均有显著性差异(P<0.05);2Gy组与4Gy组的差异有显著性意义(P<0.05), 2Gy组与6Gy组的差异有显著性意义(P<0.05); 4Gy组与6Gy组的差异无显著性意义(P<0.05)。提示,2Gy组的差异可能更为显著。流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示:0GY组与2Gy、4Gy、6Gy组均有显著性差异(P<0.05);2Gy组与4Gy组的差异有显著性意义(P<0.05), 2Gy组与6Gy组的差异有显著性意义(P<0.05); 4Gy组与6Gy组的差异无显著性意义(P<0.05)。提示,2Gy组的差异可能更为显著。结论:不同剂量放疗联合25μmol/LEGCG具有下调不同剂量放射治疗HepG2中hTERT基因表达水平的作用。同时,不同剂量放疗联合25μmol/LEGCG提高不同剂量放射治疗后HepG2细胞凋亡率。从而,EGCG有可能具有放疗增敏的作用。
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