水痘-带状疱疹病毒(Varicella-zoster Virus,VZV)是导致水痘(Varicella/chickenpox)和带状疱疹(Herpes zoster)的病原体。人体初次感染VZV时会引发水痘,之后病毒可在宿主的感觉神经中枢建立潜伏感染,在外伤、劳累、年老、免疫抑制等情况下会再次激活并引发带状疱疹。水痘多发于儿童,具有高度传染性,是一种全球流行性传染病;带状疱疹多发于中老年人,发病时通常会伴有强烈的神经痛,具有严重的危害性。目前对于水痘和带状疱疹都缺乏特效的治疗手段,接种疫苗是预防上述疾病的有效方式。当前已上市的水痘疫苗均为使用vOka疫苗株的减毒疫苗。然而有研究表明,vOka株存在再次激活引发带状疱疹的安全隐患。因此,开发更为安全有效的新型水痘疫苗具有十分重要的意义。本研究在前期工作中应用反向遗传学技术发现了 VZV的ORF7对病毒在人皮肤和神经节组织中的感染毒力具有决定性影响,ORF7敲除的VZV-7D具有发展成为新型水痘减毒活疫苗的良好潜力。本研究即在此基础上,开展了新型VZV-7D疫苗的生物分析与疫苗免疫原性评价研究,为新型VZV-7D疫苗开展后续临床前研究和申报临床试验提供重要基础和支持。在第一部分,本研究初步建立了用于VZV-7D生物分析的方法系统,从ORF7的突变基因和表达缺失、病毒颗粒的复制组装和形态结构、主要抗原蛋白表达情况等方面对VZV-7D进行了生物分析。首先,本研究应用MGB实时荧光PCR技术、双抗夹心酶联免疫吸附法、蛋白质印迹法以及免疫荧光技术在基因层面和蛋白层面分析确定了 VZV-7D存在导致ORF7表达缺失的突变。然后,本研究通过透射电子显微镜观察感染细胞内的和纯化后的VZV-7D病毒颗粒,分析发现VZV-7D在感染细胞中复制组装的顺序与发生位置和病毒颗粒的形态结构与vOka相比均无明显差异。最后,本研究又通过蛋白质印迹法对VZV-7D与vOka感染细胞后的蛋白表达情况进行了分析,结果显示,二者的表达情况无明显差别,均能表达包括糖蛋白、主要衣壳蛋白以及典型皮层蛋白在内的主要病毒抗原蛋白,在蛋白的表达量上也表现一致。在第二部分,本研究对VZV-7D的免疫原性进行了评价,使用同等剂量的VZV-7D与vOka分别对Balb/c小鼠、SD大鼠、豚鼠和兔子四种实验动物进行免疫,评价其激活体液与细胞免疫应答的水平。在体液免疫应答方面,本研究应用gpELISA和空斑减少试验对免疫后动物血清中的抗VZV抗体IgG滴度水平和VZV中和抗体效价进行了检测,结果显示,VZV-7D和vOka免疫后动物血清中的VZV抗体滴度均显著升高,且二者升高的水平相当,在随后的抗体IgG亚型分析结果显示,VZV-7D和vOka免疫宿主后均能刺激产生包含TH1细胞介导和TH2细胞介导的两种体液免疫应答,综合表明VZV-7D与vOka免疫后激活产生的体液免疫应答水平和类型均表现一致,VZV-7D在激活体液免疫应答方面具有与vOka相当的免疫原性。在细胞免疫应答方面,本研究使用不同的抗原对免疫后小鼠和大鼠的脾细胞进行刺激,然后检测其细胞因子的分泌情况。检测结果显示,VZV-7D和vOka免疫后小鼠和大鼠的脾细胞经病毒抗原刺激后分泌的IL-6、TNFα、IFNγ等多种炎症相关因子和抗病毒因子与阴性对照组相比均出现显著升高,且二者的升高水平相当,表明VZV-7D与vOka在激活细胞免疫应答方面具有同等水平的免疫原性。综上所述,本研究初步建立了用于VZV-7D生物分析的方法系统,并对VZV-7D进行了相关的生物分析,为VZV-7D的质控研究提供了技术支持和理论基础。另外,本研究还对VZV-7D的免疫原性进行了评估,分析确定了 VZV-7D具备与vOka同等水平的免疫原性,为VZV-7D后续开展临床前研究和疫苗免疫效果评估提供了研究基础。