目的:慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pul-monary disease,简称慢阻肺、COPD)是慢性反复发作性呼吸系统疾病之一。长期反复发作会导致呼吸功能严重受损,生活质量下降。同时因COPD急性加重,反复住院,给社会和家庭带来沉重的社会负担和经济负担。到2020年,COPD将占全世界疾病经济负担的第5位。因此有必要选择有效的治疗手段降低COPD所带来的双重负担。目前COPD发病诱因主要与吸烟和空气污染、职业粉尘相关,感染是导致疾病进一步加重的主要因素。COPD的发病机制目前还不清,已研究证实COPD与下列相关:反复增强的气道炎症,蛋白酶/抗蛋白酶、氧化/抗氧化失衡,细胞凋亡,气道重塑。中医将COPD的病机归纳为:吸烟以及感受六淫之邪,导致痰浊壅肺,肺气上逆,气机升降失常,病久肺失宣降、脾运失常、肾不纳气、瘀血阻络而致COPD。中医主要针对“气、痰、瘀”之病机,以降气、化痰、补气、祛瘀为主。实验用人羊膜上皮细胞(h AECs)源于胎盘羊膜组织,文献报道其具有抗炎以及减少急性肺损伤的作用。中成药润肺止嗽丸为经典方剂,具有理气、补气、止嗽、化痰作用,临床多用于有慢性咳嗽、气喘等症状的呼吸道疾病;本文通过多个实验研究探讨h AECs、润肺止嗽丸、以及h AECs联合润肺止嗽丸治疗是否对COPD大鼠有逆转作用,观察h AECs和润肺止嗽丸对COPD模型大鼠在病理形态、炎症因子、细胞凋亡、气道重塑等方面的影响以及早期干预对COPD形成的影响。以阐述h AECs和润肺止嗽丸对COPD大鼠干预的作用机理,以及作用于COPD大鼠的治疗途径。方法：1运用烟熏法联合气管内滴注脂多糖的制作方法建立COPD大鼠模型。从新鲜人胎盘中提取h AECs并进行鉴定。2将清洁级Wistar大鼠64只(雄性)通过随机数字法分为正常组、模型组、润肺止嗽丸提前治疗组、h AECs提前治疗组、润肺止嗽丸治疗1个月和3个月组,以及h AECs组、润肺止嗽丸联合h AECs治疗组共8组。3通过用润肺止嗽丸灌胃、使用h AECs气管滴入治疗后,进行血清检验;肺泡灌洗、收集肺泡灌洗液,并切取活体肺组织。4光镜下观察COPD大鼠肺组织形态学变化及其肺气肿程度、气管平滑肌的厚度。5应用放免法测定各组大鼠血及组织中白介素8(IL-8)、肿瘤坏死因子(TNF-а)。6应用ELISA法测定大鼠血及组织中肺表面活性蛋白-D(SP-D)水平及BALF中血管内皮生长因子(VEGF)水平。7 Western blot法检测肺组织中VEGF和血管内皮生长因子受体(VEGFR2)的蛋白表达。8 TUNEL法标记,观察各组凋亡细胞数。9双抗体夹心ABC-ELISA法测定肺组织中转化生长因子(TGF-β1)。10 RT-PCR半定量分析法测大鼠肺组织MMP2、MMP8表达。结果:1光镜下的各组大鼠肺组织及细支气管病理形态学观察结果 1.1正常组:气管黏膜纤毛无变短、脱落现象、纤毛排列整齐,管腔内有少量淋巴细胞浸润、无黏液栓形成;细支气管仅见少量杯状细胞,周围无肺泡变薄、膨大,未见腺体增生、管壁水肿及气道平滑肌增厚现象。1.2模型组:气管黏膜纤毛变短、部分气道有脱落现象,纤毛排列不齐,管腔内可见淋巴细胞为主的炎性细胞浸润;气道内可见黏液栓形成及炎性细胞浸润,周围肺组织有肺泡扩大,泡壁变薄、断裂。细支气管管壁增厚、平滑肌增生、管腔狭窄,分布较多杯状细胞。1.3润肺止嗽丸及h AECs提前干预组:与COPD模型组相比,部分支气管管腔增厚,管腔内有少量淋巴细胞及浸润,粘液栓形成减少,较少纤维组织增生,各级支气管壁、血管粘膜下和周围肺组织炎性细胞浸润减轻,肺泡破坏数目少,细支气管平滑肌有增厚。1.4 h AECs组:气管粘膜纤毛排列相对整齐,有少量纤毛倒伏,管壁内较COPD模型组炎性细胞浸润较少、管壁增厚减轻,有少量肺大泡形成。1.5润肺组:气管管腔增厚情况减轻,粘液栓形成减少,纤维组织增生减轻,细支气管壁、血管粘膜下和周围肺组织炎性细胞浸润减轻,周围肺泡破坏数目减少,周围血管有部分充血水肿。1.6 h AECs+润肺组:气管黏膜纤毛排列相对整齐、气道有少量炎细胞浸润;部分肺泡壁变薄或断裂,气道内较少黏液栓,气管周围肺泡破坏较少。细支气管平滑肌部分增厚。1.7润肺3个月组:气管黏膜上皮有少部分脱落,纤毛排列整齐,管壁见少量炎细胞浸润;细支气管腔内有少量黏液,管壁有部分增厚,平滑肌有增生现象。较COPD模型组相比有较少肺泡膨大,泡壁变薄。2各组MLI、MAN变化2.1正常组与模型组MLI、MAN比较有显著性差异P<0.01。说明模型组COPD成立。2.2 h AECs提前组、润肺提前组与模型组比较MLI、MAN值均P<0.05。说明提前干预使肺气肿减轻。2.3模型组与各治疗组MLI、MAN比较P<0.05。各治疗组肺气肿较模型组轻,统计学有差异。2.4 h AECs组与润肺组MLI、MAN比较有显著性差异P<0.05。h AECs组较润肺组肺气肿较轻,有统计学意义。2.5 h AECs组与h AECs+润肺组比较MLI值P<0.05,MAN值P>0.05。说明h AECs组增加润肺治疗后肺气肿改善不明显。润肺组与h AECs+润肺组比较,MLI、MAN值均P<0.01。润肺组联合h AECs治疗后肺气肿明显改善。2.6润肺组与润肺3月组MLI、MAN值比较P<0.05。延长治疗较短期治疗更能改善肺气肿。3各组大鼠炎症因子IL-8、TNF-а及SP-D血液及组织检测结果 3.1正常组与模型组血、组织中SP-D、IL-8、TNF-α的比较P<0.01。说明正常组血、组织中SP-D、IL-8、TNF-α含量少。3.2 h AECs提前组、润肺提前组与模型组血及组织中SP-D、IL-8、TNF-α比较提前治疗组可以明显降低血及组织中IL-8、TNF-α的水平,与模型组比较P<0.05、P<0.01,说明早期干预治疗能够抑制炎症因子。血及组织中SP-D的影响不明显,与模型组比较P>0.05,推断在COPD形成早期炎症反应更明显。3.3模型组与h AECs组、润肺组、h AECs+润肺组、润肺3个月血及组织中SP-D、IL-8、TNF-α比较血及组织中SP-D:各治疗组与模型组比较均P<0.05说明治疗组可以延缓COPD病情。h AECs组与润肺组比较P<0.05,说明降低SP-D水平优于润肺组,与h AECs+润肺组比较P>0.05,h AECs增加润肺治疗对降低SP-D效果不明显。润肺组与h AECs+润肺组比较P<0.05,说明润肺止嗽丸增加h AECs治疗后可明显降低SP-D,使病情得到缓解。润肺组与润肺3个月组比较P<0.01,即延长治疗较短期治疗更有效。血及组织中IL-8、TNF-α:各治疗组与模型组比较均P<0.05,说明模型组血及组织中IL-8、TNF-α含量较高。各治疗组可降低IL-8、TNF-α含量;h AECs组与润肺组比较,降低IL-8、TNF-α优于润肺组P<0.01,而h AECs增加润肺止嗽丸治疗并不能明显降低IL-8、TNF-α的水平P>0.05;润肺组增加h AECs治疗后较单纯润肺组可明显降低IL-8、TNF-α水平P<0.01。润肺组与润肺3个月组比较P<0.01,说明延长治疗有效抑制炎症因子。4各组肺组织细胞凋亡情况及凋亡指数4.1 TUNEL标记后细胞凋亡情况正常组:少量、散在凋亡细胞;模型组:有较多的肺组织细胞TUNEL染色阳性。各治疗组细胞凋亡较模型组不同程度减轻。4.2各组凋亡指数比较经过治疗后较模型组的凋亡指数(AI)明显减少P<0.05。h AECs组较润肺组凋亡指数少P<0.05。而h AECs+润肺组凋亡指数又较h AECs组、润肺组少P<0.05,说明协同治疗优于单纯治疗。延长润肺止嗽丸较短期治疗凋亡指数减少P<0.05。5各组Western blot法检测肺组织VEGF和VEGFR2蛋白表达模型组较h AECs组、润肺组和h AECs+润肺组、润肺3个月组大鼠肺组织中VEGF和VEGFR2蛋白明显低,其中h AECs组大鼠肺组织中VEGF和VEGFR2蛋白明显高于润肺组。h AECs+润肺组及润肺3个月组的VEGF和VEGFR2蛋白表达高于单纯治疗组。6各组BALF中VEGF含量比较模型组BALF中的VEGF含量明显低于正常组P<0.05,说明BALF中的VEGF含量低,经过治疗各治疗组的VEGF含量均有所增加P<0.05。h AECs组与润肺组比较,可以增加VEGF水平P<0.01,与h AECs+润肺组比较无明显差异P>0.05。润肺组与h AECs+润肺组VEGF水平比较,P<0.01,说明联合治疗较润肺组可提高BALF中的VEGF含量。润肺3月组BALF中的VEGF高于润肺组P<0.05。7各组测量平滑肌厚度比较模型组平滑肌厚度明显高于正常组P<0.01,通过干预各治疗组的平滑肌厚度减轻P<0.05。h AECs组较润肺组平滑肌厚度减轻P<0.05,与h AECs+润肺组比较P>0.05,无差异。润肺组较h AECs+润肺组气道平滑肌厚度稍重P<0.05,与润肺治疗3个月比较P<0.05,说明协同治疗及延长润肺止嗽丸治疗可以减轻平滑肌厚度。8各组大鼠肺组织MMP2、MMP8 m RNA表达结果模型组MMP2、MMP8蛋白表达明显高于正常组,各治疗组均较模型组表达低,h AECs+润肺组MMP2、MMP8蛋白较润肺3个月组表达降低;h AECs组MMP2、MMP8表达较润肺组均低;h AECs组、润肺组均高于h AECs+润肺组。9各组肺组织匀浆液TGF-β1含量结果模型组肺组织匀浆液TGF-β1含量高于各治疗组P<0.05。h AECs组TGF-β1含量较润肺组低P<0.05。增加润肺止嗽丸治疗并不能减少TGF-β1含量P>0.05。润肺止嗽丸联合h AECs治疗较单纯润肺治疗可以明显降低TGF-β1水平。润肺3个月降低TGF-β1水平优于1个月组P<0.01。结论：1使用烟熏及脂多糖气管滴入法可复制COPD模型。COPD大鼠模型存在着气道炎症、细胞凋亡及气道重塑。气道重塑通过干预具有可逆性。2在造模同时给与h AECs和润肺止嗽丸,可以降低炎症因子IL-8、TNF-α,减少肺大泡的形成,延缓COPD进程,但对SP-D无明显影响,推测在COPD形成早期炎症更明显。3 h AECs、润肺止嗽丸、h AECs联合润肺止嗽丸以及延长润肺止嗽丸治疗时间具有抑制COPD炎症因子、减少细胞凋亡、改善气道重塑的作用。h AECs组优于润肺组。4 h AECs联合润肺止嗽丸治疗COPD大鼠具有协同作用。5 h AECs抑制炎症方面有优势,对细胞凋亡影响可能与其干细胞特性相关。6延长润肺止嗽丸治疗较短期治疗效果更理想。