壬基酚（NP）是典型的内分泌干扰物（EDs）,由于高产量、高利用率以及常常见于水生环境,并且对环境造成很严重的污染,因此亟需研究者们对壬基酚建立一套完整的检测体系。但是传统检测手段耗时且价格昂贵,因此本文将重点研究如何建立一套简单易操作而且价格低廉的检测NP的免疫化学技术。免疫生化技术检测的作用机理是抗体/抗原特异性结合,可以达到即时快速检测的目的且具有灵敏性很强等优点。本文以研究壬基酚免疫抗原的合成,多克隆抗体的制备及其免疫分析技术为基础,建立了一种快速简便的壬基酚免疫检测（ELISA）方法。具体工作如下:（1）利用有机合成修饰壬基酚得到4种壬基酚半抗原（NPH）,分别为壬基酚半抗原（1）（NPH1）、壬基酚半抗原（2）（NPH2-1、NPH2-2）和壬基酚半抗原（3）（NPH3）,初步利用核磁以及质谱确定几种半抗原的化学结构,通过碳二亚胺法本文选用两种壬基酚半抗原分别与两种载体如牛血清蛋白（BSA）、卵清白蛋白（OVA）进行偶联结合,合成4种抗原NPH-BSA（1）、NPH-OVA（1）、NPH-BSA（2）和NPH-OVA（2）。（2）选用（1）中壬基酚免疫抗原NPH-BSA（1）对新西兰大白兔和Balb/c小鼠进行注射免疫,用NPH-BSA（2）和NPH-OVA（2）对同一种小鼠进行免疫,得到4种壬基酚多克隆抗体,制备得到的血清抗体结合抗原的能力很强,其在抗体滴度为64000,免疫抗原为壬基酚半抗原偶联BSA载体蛋白和免疫物种为新西兰白兔获得较好的血清滴度。（3）优化间接竞争ELISA条件,选用NPH-OVA（1）作为包被抗原,包被浓度确定为5μg/mL。选用NPH-BSA（1）免疫小鼠得到抗体,且抗体血清的稀释度为1:8000。Ig羊抗鼠抗体稀释度均为1:5000,实验中使用封闭剂是脱脂奶粉,最适抗原抗体反应pH值为7.4,恒温反应时长为1 h,采用前面的实验条件建立壬基酚间接竞争ELISA标准曲线,本文最终得到NP的灵敏度IC₅₀为158μg/L,最低检出限为1.4695μg/L。