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目的:观察在水杨酸钠(sodium salicylate，SS)作用下，大鼠螺旋神经节神经元(spiral ganglion neurons，SGN)上GABAA受体(γ-aminobutyric acid a receptor,GABAAR)活动对NMDA受体(N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDAR)mRNA和蛋白的影响，进一步完善水杨酸钠耳毒性的受体机制。
方法:体外培养新生SD大鼠SGN，采用免疫荧光检测NMDA受体的NR2B亚单位表达，荧光定量PCR和Western blot观察不同浓度水杨酸钠(0.5或5mM)作用下，分别激动或抑制GABAA受体对NMDA受体的NR2B亚单位mRNA、蛋白和磷酸化水平的影响。
结果:(1)免疫荧光显示，SGNs的胞体和突起均有NR2B的表达;(2)0.5/5mM水杨酸钠、10μM蝇蕈醇（GABAA受体激动剂）和20μM荷包牡丹碱(GABAA受体抑制剂)加入培养液处理30分钟后，荧光定量PCR结果显示，蝇蕈醇使NR2B mRNA的表达下调10.96％(F=43.084，P=0.003＜0.05)，而水杨酸钠可逆转蝇蕈醇的下调作用;荷包牡丹碱使NR2B mRNA的表达上调21.40％(P=0.003＜0.05)，其与水杨酸钠联合作用使上调程度更明显(P=0.000＜0.05);上述所有改变在酪氨酸激酶Fyn的抑制剂PP2作用下均消失(F=0.921，P=0.552＞0.05);(3)与上述(2)相同方法处理后，Western blot结果显示，蝇蕈醇使NR2B膜蛋白的表达下调7.39％(F=14.501，P=0.005＜0.05)，水杨酸钠与蝇蕈醇共同作用可使下调程度更明显(P=0.000＜0.05)，其中0.5/5mM水杨酸钠和蝇蕈醇联合作用与单纯蝇蕈醇比较，分别减少30.82％、55.33％;荷包牡丹碱使NR2B膜蛋白的表达上调15.73％(P=0.005＜0.05)，水杨酸钠与荷包牡丹碱共同作用可逆转这一过程(P=0.012＜0.05)，其中0.5/5mM水杨酸钠和荷包牡丹碱联合作用与单纯荷包牡丹碱比较，分别减少14.23％、29.72％。上述各处理组的总蛋白与对照组比较无明显改变(F=1.111，P=0.401＞0.05);与mRNA改变相同，上述改变在PP2作用下均消失(F=0.436，P=0.884＞0.05);(4)与上述(2)相同方法处理后，Western blot观察激酶和NMDA受体磷酸化水平。结果显示，蝇蕈醇可下调Fyn、p-Y1472蛋白的表达，荷包牡丹碱可上调Fyn、p-Y1472蛋白的表达(P＜0.05)。其中，0.5mM、5mM水杨酸钠和蝇蕈醇共同作用与单独蝇蕈醇作用比较下调程度更明显(P＜0.05)，Fyn蛋白分别减少17.48％、48.65％，p-Y1472蛋白分别减少25.82％、29.95％;0.5mM、5mM水杨酸钠与荷包牡丹碱共同作用可逆转单独使用荷包牡丹碱的作用(P＜0.05)，Fyn蛋白分别减少20.91％、33.06％，p-Y1472蛋白分别减少25.43％、54.60％。然而，水杨酸钠和GABAA受体活动时，各处理组的CK2蛋白与对照组比较无明显改变(F=0.742，P=0.655＞0.05)，同时p-S1480蛋白亦无改变(F=1.230，P=0.337＞0.05)。
结论:(1)GABAA受体激活可使NMDA受体NR2B mRNA的表达下调，水杨酸钠可减弱该下调作用;
(2)GABAA受体激活可促进NMDA受体内化，且水杨酸钠可易化该内化作用;
(3)Fyn依赖的Y1472位点磷酸化介导水杨酸钠和GABAA受体调节NMDA受体的内化。
方法:体外培养新生SD大鼠SGN，采用免疫荧光检测NMDA受体的NR2B亚单位表达，荧光定量PCR和Western blot观察不同浓度水杨酸钠(0.5或5mM)作用下，分别激动或抑制GABAA受体对NMDA受体的NR2B亚单位mRNA、蛋白和磷酸化水平的影响。
结果:(1)免疫荧光显示，SGNs的胞体和突起均有NR2B的表达;(2)0.5/5mM水杨酸钠、10μM蝇蕈醇（GABAA受体激动剂）和20μM荷包牡丹碱(GABAA受体抑制剂)加入培养液处理30分钟后，荧光定量PCR结果显示，蝇蕈醇使NR2B mRNA的表达下调10.96％(F=43.084，P=0.003＜0.05)，而水杨酸钠可逆转蝇蕈醇的下调作用;荷包牡丹碱使NR2B mRNA的表达上调21.40％(P=0.003＜0.05)，其与水杨酸钠联合作用使上调程度更明显(P=0.000＜0.05);上述所有改变在酪氨酸激酶Fyn的抑制剂PP2作用下均消失(F=0.921，P=0.552＞0.05);(3)与上述(2)相同方法处理后，Western blot结果显示，蝇蕈醇使NR2B膜蛋白的表达下调7.39％(F=14.501，P=0.005＜0.05)，水杨酸钠与蝇蕈醇共同作用可使下调程度更明显(P=0.000＜0.05)，其中0.5/5mM水杨酸钠和蝇蕈醇联合作用与单纯蝇蕈醇比较，分别减少30.82％、55.33％;荷包牡丹碱使NR2B膜蛋白的表达上调15.73％(P=0.005＜0.05)，水杨酸钠与荷包牡丹碱共同作用可逆转这一过程(P=0.012＜0.05)，其中0.5/5mM水杨酸钠和荷包牡丹碱联合作用与单纯荷包牡丹碱比较，分别减少14.23％、29.72％。上述各处理组的总蛋白与对照组比较无明显改变(F=1.111，P=0.401＞0.05);与mRNA改变相同，上述改变在PP2作用下均消失(F=0.436，P=0.884＞0.05);(4)与上述(2)相同方法处理后，Western blot观察激酶和NMDA受体磷酸化水平。结果显示，蝇蕈醇可下调Fyn、p-Y1472蛋白的表达，荷包牡丹碱可上调Fyn、p-Y1472蛋白的表达(P＜0.05)。其中，0.5mM、5mM水杨酸钠和蝇蕈醇共同作用与单独蝇蕈醇作用比较下调程度更明显(P＜0.05)，Fyn蛋白分别减少17.48％、48.65％，p-Y1472蛋白分别减少25.82％、29.95％;0.5mM、5mM水杨酸钠与荷包牡丹碱共同作用可逆转单独使用荷包牡丹碱的作用(P＜0.05)，Fyn蛋白分别减少20.91％、33.06％，p-Y1472蛋白分别减少25.43％、54.60％。然而，水杨酸钠和GABAA受体活动时，各处理组的CK2蛋白与对照组比较无明显改变(F=0.742，P=0.655＞0.05)，同时p-S1480蛋白亦无改变(F=1.230，P=0.337＞0.05)。
结论:(1)GABAA受体激活可使NMDA受体NR2B mRNA的表达下调，水杨酸钠可减弱该下调作用;
(2)GABAA受体激活可促进NMDA受体内化，且水杨酸钠可易化该内化作用;
(3)Fyn依赖的Y1472位点磷酸化介导水杨酸钠和GABAA受体调节NMDA受体的内化。