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丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)属于唇形科的一种传统中药材,在我国大部分地区均有分布,但主要以陕西、安徽及河南等省份为主要产地。随着对丹参有效成分及合成途径的深入了解,对其相关功能基因的研究已迫在眉睫。多酚氧化酶(polyphenol oxidase, PPO)普遍存在于植物界,研究发现,PPO能响应干旱胁迫,并与总酚含量存在密切关联。但该基因能否调控酚酸类物质合成尚不清楚。本研究以丹参毛状根为材料,对cDNA第一条链编码的多酚氧化酶基因进行克隆和表达。利用生物信息学的方法,对多条管状花目的多酚氧化酶基因及其蛋白进行分析。以酵母提取物、Ag+、抗坏血酸以及L-半胱氨酸对丹参毛状根进行处理,利用实时定量PCR法对丹参多酚氧化酶基因进行表达分析,用高效液相色谱法对丹酚酸B的积累量进行评估。通过研究,我们得到以下结果:1、克隆cDNA第一条链编码的多酚氧化酶基因,Genebank注册号为KF712274。丹参多酚氧化酶基因cDNA全长1930bp,其中开放阅读框1769bp,编码氨基酸589个。对管状花目中多条多酚氧化酶基因及其蛋白进行序列进行比对后发现,丹参多酚氧化酶与其他序列之间存在同源性。2、利用生物信息学技术对丹参毛状根多酚氧化酶编码蛋白进行预测,其分子量约65.8kD,等电点为6.56。属于亲水性蛋白,且不具有信号肽。属于酪氨酸酶基因家族蛋白,具有PPO1_DWL和PPO1_KFDV两个结构域。8个α-螺旋以及7个β-折叠分散在整个肽链中。首次在类囊体转运结构域的C-末端发现两个高度保守的N-豆蔻酰化位点,在DWL模体的N-末端发现一个酪氨酸激酶Ⅱ磷酸化位点。3、在丹参毛状根培养液中加入不同诱导子进行处理,利用实时荧光定量PCR检测多酚氧化酶基因表达量,结果表明,该基因在酵母提取物处理中表达量显著上调,但在Ag+、抗坏血酸和L-半胱氨酸处理中表达受到显著抑制。4、在丹参毛状根培养液中加入不同诱导子进行处理,利用高效液相色谱法检测丹参毛状根中有效成分丹酚酸B含量,结果表明,在酵母提取物处理中丹酚酸B含量显著上调,但在Ag+、抗坏血酸和L-半胱氨酸处理中丹酚酸B含量有所降低。