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高山被孢霉是重要的多不饱和脂肪酸(PUFAs)工业化生产菌株之一,其脂肪酸合成代谢途径已经得到较为深入的研究。基因组的注释结果显示有三个不同的基因编码Δ9脂肪酸脱饱和酶。与Δ9-I和Δ9-II脂肪酸脱饱和酶基因不同,ω9酶基因(FADS9-III)在培养周期内几乎不发生转录,表明其在一般条件下不发挥作用。因此,ω9脂肪酸脱饱和酶在高山被孢霉体内的作用及其底物特异性值得研究,其存在的意义也值得探讨。本研究克隆并同源表达了高山被孢霉ATCC32222中的ω9脂肪酸脱饱和酶基因FADS9-III,明确了其作用和底物特异性,并初步探究了培养温度对ω9脱饱和作用的影响。在此基础上,通过外源添加特定的脂肪酸标准品,进一步研究了ω9脂肪酸脱饱和酶对长链饱和脂肪酸的催化作用。首先,在载体pBIG2-ura5s和pET28a-ITs的基础上,构建了表达载体pBIG2-ura5s-FADS9-III,转化农杆菌C58C1,得到重组菌株。其次,通过农杆菌介导的方法,成功地将基因FADS9-III整合到高山被孢霉尿嘧啶营养缺陷型的基因组上。同时确立了根癌农杆菌介导转化的最优条件:乙酰定香酮(AS)使用浓度200μM,农杆菌菌液浓度OD600为0.8,共培养温度23°C,共培养时间32h。然后,通过遗传稳定性测试、PCR验证筛选到稳定遗传的重组菌株,并对其生长特性作了描述。通过基因转录水平分析和脂肪酸产物检测可知,FADS9-III基因的转录量提高,重组菌株中ω9脂肪酸脱饱和酶具有一定的活性,从而实现了ω9脂肪酸脱饱和酶在高山被孢霉体内的同源表达。再次,考察了ω9脂肪酸脱饱和酶的表达对高山被孢霉脂肪酸组成的影响。通过脂肪酸组成分析可知,ω9脂肪酸脱饱和酶对棕榈酸(C16:0)和硬脂酸(C18:0)都具有活性,重组菌株中棕榈油酸(C16:1)和油酸(C18:1)的含量相比对照菌株分别提高了3.25倍和1.95倍,分别达到脂肪酸总量的0.39%和38.33%,并且ω9脂肪酸脱饱和酶的表达对于其他脂肪酸组分含量的影响很小,从而提高了菌体脂肪酸组分的不饱和度。低温培养条件下ω9脂肪酸脱饱和酶的脱饱和作用增强。重组菌株中ω9脱饱和反应的产物C16:1的产量(1.34%)相比28°C时提高了3.44倍,C16:0的转化率提高了9.24倍,而C18:1的产量也达到脂肪酸总量的42.48%。同时,在重组菌株中还检测到少量C24:1(ω-9)(神经酸)的存在,其含量占到总脂含量的0.50%。最后,研究了重组菌株对特定的长链脂肪酸(C20:0、C22:0、C24:0)的催化效率。结果表明,重组菌株和对照菌株对这几种外源底物都有一定量的吸收。相比对照菌株,重组菌株细胞内C20:1的含量没有变化,也未检测到C22:1的生成。而C24:1(ω-9)的产量达到脂肪酸总量的2.50%左右,相比无外源添加条件下的培养,产量提高了5倍。说明ω9脂肪酸脱饱和酶可能对C24:0或更长链的脂肪酸有催化作用。