目的：肿瘤化疗失败的原因往往是多药耐药(MDR)的出现，因此有效地控制MDR的发生已成为肿瘤治疗的关键。目前开发的MDR逆转剂因毒副作用大或作用靶点单一等而无法达到令人满意的程度。中药因资源丰富、低毒、作用靶点多、价格便宜等优点，已成为目前肿瘤MDR逆转剂研究的重点。本研究拟通过体外实验观察中药斑蝥酸钠(SCA)对人多药耐药K562/AO<,2>细胞是否有逆转作用，并初步探讨该中药逆转MDR的可能机制。 方法：选取经典的耐药细胞系－人多药耐药K562/AO<,2>细胞株及相应的敏感株K562，采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测SCA对K562、K562/AO<,2>细胞的细胞毒作用，从而选择对两株细胞的杀伤率均<10％的浓度作为该药物的无毒剂量。以维拉帕米(VRP)为阳性对照，采用无毒剂量的SCA及VRP分别与阿霉素(ADM)共同作用于K562/AO<,2>、K562细胞株进行MDR逆转实验；运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析SCA及VRP分别处理K562/AO<,2>细胞前后mdr1基因的表达水平；应用流式细胞术(FCM)法分析SCA及VRP分别处理K562/AO<,2>、K562细胞前后，细胞Bcl-2、P-gP蚩白的表达水平，以及处理前后两细胞内ADM的平均荧光强度。 结果：1 MTT结果显示：SCA在(0．05～10)μg/ml浓度范围内能抑制K562细胞和K562/AO<,2>细胞的体外增殖，且随着浓度增加抑制率相应升高，由回归分析得出，当SCA的终浓度<0.11μg/ml时，对两细胞生长无明显抑制作用，本实验选取0.1μg/ml作为无毒剂量。0.1μg/mlSCA及5μg/mlVRP<[1]>分别作用K562/AO<,2>细胞后，对ADM的IC<,50>由(40.85±0.40)μg/ml 分别降至(27.09±0.63)μg/ml、(4.29±0.13)μg/ml，部分逆转了K562/AO<,2>细胞对ADM的耐药性，其逆转倍数分别为1.51倍和9.52倍，两药物逆转程度比较，SCA作用较弱，差异具有极显著性(P<0.01)。2RT-PCR检测结果显示：K562/AO<,2>细胞高表达mdr1 mRNA，K562细胞不表达mdr1 mRNA，两株细胞mdr1 mRNA的表达水平具有极显著性差异(P<0.01)。SCA及VRP分别作用K562/AO<,2>细胞24h、48h、72h，mdr1 mRNA的表达均随作用时间延长而逐渐降低，以72h表达最低，两药物比较无显著性差异(P>0.05、)。3 FCM检测结果显示：K562细胞膜表面不表达P-gp蛋白，K562/AO<,2>细胞膜表面P-gp蛋白表达量的相对值(FI)N 5.82±0.08，两株细胞P-gp蛋白的表达具有极显著性差异(P<0.01)；SCA作用K562/AO<,2>细胞24h、48h、72h，P-gp 蛋白表达量的FI值随作用时间延长而逐渐降低，72hP-gp 表达最低为2.71±0.02；VRP作用相同时间后FI值降低更显著，72h P-gp表达降为1.16±0.03，两者均显著降低P-gp蛋白的表达，其中SCA降低P-gp蛋白表达程度不及VRP，差异具有极显著性(P<0.01)。K562、K562/AO<,2>细胞均可检测到Bcl+-2蛋白的表达，且在两株细胞中Bcl-2蛋白的表达无明显差异(P>0.05)；SCA及VRP分别作用K562细胞24h、48h、72h，Bcl-2表达量的FI值均随作用时间延长而逐渐降低，72h Bcl-2表达最低；同一时间点两药物比较，作用24h时，SCA降低Bcl-2蛋白表达能力较VRP强(P<0.01)，随作用时间的延长，两药物降低Bcl-2蛋白表达能力无明显差别(P>0.05)；SCA及VRP分别作用K562/AO<,2>细胞相同时间后，Bcl-2表达量的FI值随作用时间延长而逐渐降低，72h表达最低，分别为1.59±0.05、1.67±0.08；两药物均降低K562/AO<,2>细胞 Bcl-2 蛋白的表达，两者比较无明显差异(P>0.05)。单独应用阿霉素处理K562/AO<,2>细胞，(选取30～120min)细胞内阿霉素浓度的相对值(mode)为(31.01±0.79)～(44.81±1.51)，联合SCA和VRP分别处理细胞后，细胞内阿霉素的mode值随作用时间的延长而相应的增加，具有时间依赖性。其中SCA增加细胞内ADM的能力低于 VRP，两者比较差异具有极显著性(P<0.01)。 结论：1 斑蝥酸钠在(0.05～10)μg/ml 浓度范围内，能抑制K562细胞和K562/AO<,2>细胞的体外增殖，并呈浓度依赖性。2 无毒剂量的斑蝥酸钠对K562/AO<,2>细胞阿霉素耐药性体外有一定的逆转作用，但较维拉帕米的逆转作用明显减弱。3可能的逆转机制：①一定浓度的斑蝥酸钠可能通过在mRNA转录水平和蛋白翻译水平抑制K562/AO<,2>细胞中mdr1mRNA、P-gp的表达，降低K562/AO<,2>细胞的耐药性，逆转肿瘤细胞多药耐药。②一定浓度的斑蝥酸钠可能通过抑制P-gp药物泵的泵出功能，提高细胞内化疗药物的聚集，增加耐药细胞内化疗药物的浓度，从而有效杀伤肿瘤细胞达到逆转肿瘤细胞耐药。③一定浓度的斑蝥酸钠可能通过降低Bcl-2的表达，解除对Bax\Bak的抑制，可能也解除了对药物损伤死亡信号的抑制，从而促进细胞凋亡来逆转肿瘤细胞耐药。4 本研究为临床应用提供了理论依据，为肿瘤多药耐药逆转提供了新的选择。