论文部分内容阅读
本实验研究苦荞麦籽粒提取物对实验性肝损伤的保护作用,主要从以下两个方面进行研究:(1)苦荞麦籽粒提取物(FTGE)的提取工艺、制备与鉴定;(2)FTGE对实验性肝损伤受试动物肝组织中MDA、NO、SOD、GSH-Px水平以及血清ALT、AST活性的影响。
一、FTGE的提取工艺、制备与鉴定
在溶剂优选实验的基础上,选择溶剂用量、浸提温度、乙醇浓度、浸提时间四种因素,采用L9(34)正交设计,筛选FTGE的提取制备工艺。实验发现,以60%乙醇作为苦荞麦籽粒总黄酮提取的溶剂系统,以10倍于苦荞麦籽粒粉的用量,在50℃条件下震荡提取3h,是苦荞总黄酮提取的最佳工艺条件。
以芦丁标准品制备标准溶液,建立标准工作曲线,以分光光度法测定FTGE中生物类黄酮的含量,精密度RSD<2%,加样平均回收率96.2%。准确度高,操作简便。
经薄层层析和显色反应,鉴别FTGE中黄酮类化合物种类。实验发现其中含有类似芦丁、槲皮素结构的多种黄酮类化合物。
二、FTGE对实验性肝损伤的保护作用
(1)FTGE对四氯化碳(CCl4)致急性肝损伤的保护作用。
小白鼠60只,随机分为6组,每组10只。正常对照组、CCl4模型组灌胃给予等量纯化水,阳性对照组灌胃给予联苯双酯200mg.kg-1.d-1,低剂量实验组、中剂量实验组、高剂量实验组分别灌胃给予FTGE20,40,60g.kg-1.d-1,各组均连续给药7d。7d后,除正常对照组外,其他各组小鼠均腹腔注射0.1%CCl4花生油溶液10ml.kg-1,禁食24h,摘眼球取血,分离血清,测试血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)值。分离肝组织,计算肝脏重量指数(每10g体重的肝脏毫克数);同时测定肝组织中丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)和谷光甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性。制作各组肝组织切片,观察其组织学和形态学的变化。实验发现连续7d灌胃给予20、40、60g.kg-1.d-1FTGE,能明显抑制肝损伤小鼠血清ALT、AST活性的升高(P<0.01),显著抑制肝组织中MDA、NO含量的升高及SOD、GSH-Px活性的下降(P<0.01)。说明FTGE对CCl4引起的小鼠急性肝损伤具有保护作用。
(2)FTGE对D-半乳糖胺(D-Galn)致急性肝损伤的保护作用。
取小白鼠60只,雌雄各半,分成6组,每组10只.正常对照组、D-GalN模型组灌胃给予0.9%NaCl20m1.kg-1.d-1,阳性对照组灌胃给予联苯双酯150mg.kg-1.d-1,各不同剂量实验组分别灌胃给予FTGE20,40,60g.kg-1.d-1,各组均连续给药12d,末次给药后1h,除正常对照组外,其他各组小鼠均腹腔注射10%D-GalN800mg.kg-1,禁食过夜,16h后摘眼球取血,分离血清,测试血清中ALT、AST值。分离肝组织,计算肝脏重量指数;同时测定肝组织中MDA、NO含量以及SOD和GSH-Px的活性。制作各组肝组织切片,观察其组织学和形态学的变化。实验发现连续12d灌胃给予20、40、60g.kg-1.d-1FTGE,能明显抑制肝损伤小鼠血清ALT、AST活性的升高(P<0.01),显著抑制肝组织中MDA、NO含量的升高及SOD、GSH-Px活性的下降(P<0.01)。说明FTGE能增强肝组织抗脂质过氧化作用,对D-GalN引起的小鼠急性肝损伤具有保护作用。
结论以10倍量60%乙醇在50℃条件下震荡提取的FTGE含有多种黄酮类化合物,对D-GalN和CCl4引起的急性肝损伤具有保护作用。其作用可能与其提高肝组织中抗氧化酶含量有关。