白桦AP2基因的遗传转化及生物学功能鉴定

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APETALA2/ethylene-responsive element binding protein(AP2/EREBP)是一个参与植株生长发育和胁迫应答的转录因子家族,存在于所有植物中。其中AP2亚家族转录因子参与调控花的发育,胚珠的发育和种子的发育。AP2基因属于花器官发育的A类基因,参与花分生组织特性的建立、花器官特性的特化及调控。该基因具有不同于其他花发育相关基因的独特的AP2结构域,此结构域具有60-70个保守的氨基酸残基,由3个反向平行的β-折叠和一个两亲性的α-螺旋所组成,该结构与锌指结构相类似。构建BplAP2基因的高效植物表达载体pBI121-AP2,利用CaMV35S启动子调控BplAP2基因的表达。通过农杆菌介导的遗传转化法得到了转BplAP2基因白桦植株和转BplAP2基因拟南芥植株,利用卡那霉素选择性培养基对所获得的转BplAP2基因植株进行抗性筛选,BplAP2基因特异引物、NPTⅡ引物及GUS引物三重PCR检测,共获得转BplAP2基因白桦2个株系、转BplAP2基因拟南芥15个株系。用选择性培养基筛选出4个转基因纯系,对ap2突变体拟南芥及转BplAP2基因纯系拟南芥植株表型进行观察结果显示:ap2突变体拟南芥花表现出花瓣缺失,雄蕊数量减少并出现未融合的萼片状心皮结构,转BplAP2基因拟南芥花、侧枝和茎生叶的着生发生变化。与此同时,ap2突变体拟南芥植株莲座叶数量减少、莲座叶直径减小、角果数量减少、单一角果种子数量增多、种子百粒重增重,BplAP2转基因植株莲座叶数量增多、莲座叶直径增大、角果数量增多、单一角果种子数量变化较小、种子百粒重减轻。推测BplAP2基因不仅参与调控花器官发育,也参与侧枝、莲座叶以及种子的发育。对种子可溶性蛋白质和游离脂肪酸含量测定表明:ap2突变体种子中两种物质含量增加,转BplAP2基因拟南芥种子中两种物质含量减少。推测BplAP2基因参与调控蛋白质和脂肪酸合成途径,调节围着的合成,进而影响种子的重量。在转BplAP2基因白桦和转BplAP2基因拟南芥中对BplAP2基因进行qRT-PCR分析表明,在过表达BplAP2基因的白桦各组织中该基因的表达量均有所升高;在转BplAP2基因拟南芥花中BplAP2基因的表达量最高,茎中的表达量最低。在转BplAP2基因拟南芥中对AP2基因相关的花发育基因的表达情况进行分析,结果表明:除LFY在根中表达量变化不明显之外,TFL1、AP1和AG在营养组织根和茎中表达量均明显升高;在叶和角果中LFY和7FL1的表达量上升,APi和AG的表达量下降;在花中LFY的表达量变化不明显,AP1的表达量上升,TFL1和AG的表达量下降。推测BplAP2基因除了参与花器官发育外,还通过与AP1、LFY、TFL1和AG相互调节共同控制植物营养器官的发育。
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