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目的:比较猴头菇多糖硒化前后对DCs免疫功能的影响,揭示硒化修饰提高猴头菇多糖增强免疫活性的可能,并筛选出最佳猴头菇硒多糖,探讨其对DCs信号通路的影响。方法:1.以猴头菇为原材料,用水提醇沉法得到粗多糖,并经过DEAE-52和SephadexG-100纯化得到HEP。采用硝酸-亚硒酸钠,根据正交试验设计对HEP进行硒化修饰得到sHEP。2.树突状细胞模型的建立:提取6～8周龄的ICR小鼠股骨和胫骨的髓细胞,在体外联合使用rmIL-4和rmGM-CSF于37 ℃,5%CO2培养箱中培养,采用显微镜和流式细胞仪进行细胞成熟度的鉴定。3.求出HEP和sHEP的最大安全浓度,在统一的安全浓度范围内检测HEP和sHEP对DCs刺激T淋巴细胞增殖的作用,筛选出效果较佳的3种sHEP,并用这3种硒多糖与HEP进行下一阶段试验的比较。为了验证硒化修饰对增强多糖免疫活性是否有帮助,我们比较HEP和sHEP对DCs抗原提呈能力、分泌IFN-γ、IL-]2、MHC II分子和CD86分子的能力和对抗原的吞噬能力。并从这3种硒多糖中筛选出最佳的硒多糖进行下一步试验。4.将筛选的最佳硒多糖和多糖同时刺激DCs,检测MAPK和NF-KB信号通路相关蛋白的表达量。结果:1.猴头菇粗多糖的提取率7.01%,总糖含量为42.05%,经纯化后得到糖含量为81.3%的HEP,将HEP进行HNO3-Na2SeO3修饰得到9种sHEP。2.树突状细胞模型成功建立:随着培养天数的增加,所制备细胞具有DCs典型的形态特征,到第7天时,CDllc的阳性细胞比率达到88.2%，CD86和MHCII类分子的阳性比率分别达到87.2%和46.1%。3.根据不同多糖对DCs前体细胞增殖试验结果,统一设定安全浓度为12.5μg/mL,在安全浓度范围内检测出sHEP1、sHEP2和sHEP8对DCs刺激T淋巴细胞增殖作用的效果最强,选这3种硒多糖与HEP进行下一步试验的比较。(1)sHEP1、sHEP2、sHEP8和HEP均可以降低DCs吞噬抗原能力、增强抗原提呈能力,sHEP2的作用效果优于其他组。(2)比较HEP和sHEP(sHEP1,sHEP2,sHEP8)对DCs分泌细胞因子的能力发现,sHEP2和sHEP8处理组刺激DCs分泌IFN-γ的能力高于HEP和sHEP1处理组。sHEP1、sHEP2和sHEP8处理组刺激DCs分泌IL-12的能力高于HEP。(3)比较HEP和sHEP(sHEP1,sHEP2,sHEPs)刺激 DCs 表达 CD86 和 MHCⅡ 类分子发现,HEP和sHEP均可以显著上调CD86的表达量。在表达MHCII类分子方面,以sHEP2作用效果最明显。通过以上试验结果说明,硒化修饰可以提高猴头菇多糖的免疫活性,促进DCs表型和功能的成熟。在这3种硒多糖中,以sHEP2的作用效果最佳。4.探讨sHEP2和HEP对DCs的MAPK和NF-KB信号通路的影响,研究发现,sHEP2和HEP均能激活DCs的MAPK和NF-KB信号通路,sHEP2刺激DCs产生p-p38、p-ERK和p-JNK蛋白、增加IKBα和IKBβ蛋白降解、促进DCs表达p50和p65蛋白的能力均强于HEP。结论:硒化修饰可以提高猴头菇多糖的免疫活性,增强DCs的免疫能力。HEP和sHEP2可能是通过激活MAPK和NF-kB信号通路来诱导DC表型和功能的成熟。