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目的研究niRNA-29b (miR-29b)在宣威肺癌中的表达和功能,通过构建双荧光报告载体验证miRNA-29b的靶基因(PUMA)；探讨miR-29b在云南宣威肺癌细胞株XWLC-05中对其靶基因PUMA的调控作用,并进一步探讨miR-29b与P53的关系及是否通过PUMA来实现。方法1.提取宣威肺癌组织中的miRNA,用qRT-PCR分析miR-29b的表达情况以及与肺癌各病理特征之间的相关性；2.通过MTT和Caspase3/7、9实验,分析]miR-29b对宣威肺癌细胞株XWLC-05的细胞增殖和凋亡的影响；3.利用生物信息学软件找至(?)miR-29b与PUMA的结合位点,通过基因克隆的方法构建双荧光素酶报告基因载体；4.培养细胞,进行转染后,通过双荧光素酶报告基因实验,检测荧光素酶活性,验证PUMA是否为miR-29b的靶基因;5.分别提取转染后的各组细胞中的mRNA和蛋白,通过实时荧光定量PCR和Western blotting分析,探讨niR-29b对PUMA的调控作用；6.运用细胞转染和western blotting分析,探讨miRNA-29b对细胞增殖和凋亡的作用是否通过依赖p53途径。结果1. miR-29b在宣威肺癌组织中表达降低,miR-29b的低表达和肺癌患者淋巴结转移相关,与年龄、性别及肿瘤分化程度和吸烟史无关。2.MTT检测细胞增殖状态：miR-29b在Over-expression转染组能抑制细胞增殖,在In-expression转染组能促进细胞增殖。3. caspase3/7、9活性的变化：Over-expression转染组caspase3/7、9活性均降低；In-expression转染组caspase3/7、9活性均升高4.所构建的双荧光素酶基因载体经酶切和测序分析显示正确；5.荧光素酶报告基因分析显示：miR-29b能够直接作用于PUMA基因的3’UTR端。6.实时荧光定量PCR检钡(?)PUMA mRNA的表达变化,结果显示：XWLC-05细胞经转染后各个处理组之间PUMA mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05)；7. Western blot检钡(?)PUMA蛋白的表达变化,结果显示：转染Over-expression的miR-29b载体后,PUMA蛋白表达量增多；In-expression转染组PUMA蛋白表达量相对过表达组减少,但仍高于对照组；8. Western blot检测P53蛋白的表达变化,结果显示：转染Over-expression的miR-29b载体后,P53蛋白表达量增多；而转染PUMA载体后,P53蛋白表达量变化并无差异。结论1. miR-29b在宣威肺癌组织中低表达,miR-29b的低表达和肺癌患者淋巴结转移相关,与年龄、性别及肿瘤分化程度和吸烟史无关；2. miR-29b能抑制细胞增殖、促进细胞凋亡；3.成功构建了双荧光素酶报告基因载体,在云南宣威肺癌细胞株XWLC-05中, PUMA是miR-29b的靶基因；4.在XWLC-05细胞中,miR-29b对PUMA的转录水平无调控作用,而作用于PUMA的翻译水平；5.在XWLC-05细胞中,miR-29b和抑癌基因P53蛋白的表达水平呈现正相关性。即miR-29b能上调P53的表达,但在该途径中的靶点可能不是PUMA,其参与的分子及其机制需进一步研究。