结肠癌是胃肠道常见肿瘤。放疗对结肠癌敏感性较差及小肠毒副作用明显。常规化疗时,由于抗肿瘤药物通常缺乏区分正常细胞和恶性肿瘤细胞的选择性,容易引起全身的毒副作用、降低患者对治疗的耐受性。肿瘤靶向治疗有望将抗肿瘤药物选择性地集中在肿瘤组织,而没有临床上区域动脉灌注所带来的手术痛苦和风险,因而是较好的替代方法。目前,肿瘤靶向治疗最大的障碍是缺乏合适的具有特殊识别能力的药物载体。寻找选择性强、能够有效载带抗肿瘤药物的靶向载体,并考察其在体内的靶向性及在肿瘤模型中的活性,是靶向治疗研究中的热点领域。 近年来,凝集素在肿瘤研究中的应用受到了越来越广泛的关注。人体细胞膜含有丰富的糖蛋白和糖脂,其中糖类部分的单糖和寡糖可与凝集素发生特异性的亲和结合,不同细胞的受体由于所含糖的结构不同,只能与特定的凝集素结合,从而使凝集素具有“识别”某种细胞的能力。而且,某些肿瘤细胞存在着特异性的凝集素受体。此外,凝集素无免疫源性、与单糖及糖复合物中的糖结构部分的识别具有高度特异性、具有多价结合能力并且结合了某些药物、毒性蛋白、放射性同位素后其活性保持不变。因此,凝集素在肿瘤的靶向治疗中有着极好的应用前景。将抗肿瘤药物与凝集素偶联,选择合适的凝集素或许可以控制细胞对偶联物的摄取和其在细胞内的传递途径,从而实现肿瘤治疗真正意义上的细胞靶向。但目前,有关其在肿瘤靶向治疗中的作用的研究尚在起步阶段。 花生凝集素(PNA)是从花生中提取并纯化的一种蛋白质,具有如下主要特点:1)不凝集正常的淋巴细胞和血液细胞,如红细胞、白细胞;2)花生凝集素是种子植物的组成成分,亦是人常常食用的营养物质,无明显毒副作用;3)对酸性环境和多种酶有较好抗性;4)具有多价结合能力;5)结直肠肿瘤细胞上PNA受体与正常组织之间存在显著性差异,在大量癌变的结肠上皮细胞的细胞膜上和细胞的顶端胞浆内出现了PNA结合位点。以上特点说明PNA具有作为抗肿瘤药物载体用于肿瘤靶向治疗的可能性。 本课题选择治疗胃肠道肿瘤的一线药物5—氟尿嘧啶(5-Fu)作为模型药物,以在胃肠道肿瘤有高表达受体的花生凝集素为靶向载体,通过EDC/NHS一步法制备出可口服给药的5-Fu-PNA前体偶联物。综合考察了该偶联物的制备工艺、特异单糖对凝集素生物活性的保护作用和体外稳定性以及偶联物的电泳性质。采用流式细胞仪和荧光显微镜,以人结肠癌细胞LoVo和人正常肝细胞Chang作为代表性细胞模型,通过模型细胞荧光强度的变化对偶联物的细胞作用机制进行探