地中海拟无枝酸菌(Amycolatopsis mediterranei)是一种稀有放线菌,可以产生临床上有着重要应用的抗生素——利福霉素,其衍生物对于治疗分枝杆菌特别有效,是治疗由结核分枝杆菌和麻风分枝杆菌引起的结核病和麻风病的一线药物。地中海拟无枝酸菌是放线菌目、假诺卡氏菌科、拟无枝酸菌属的好氧革兰氏阳性菌,在固体培养基上呈现为橘红色菌落。将抗生素抗性基因作为标记时,筛选无痕基因敲除菌株不容易,故要建立简便的筛选方法。菌落颜色为橘红色的地中海拟无枝酸菌,通过敲除茄红素生物合成途径中第一个反应的酶(1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶)编码基因dxs,获得菌落颜色为白色的地中海拟无枝酸菌突变菌株。通过电击转化,将携带dxs表达盒的mtf(S-丙二酰转移酶)基因同源重组载体导入到上述的白色菌株中,获得菌落颜色为橘红色的mtf基因失活菌株。将无标记的mtf基因同源重组载体导入到橘红色的mtf基因失活菌株中,获得菌落颜色为白色的mtf基因敲除菌株。在工业发酵中,由于菌株发酵周期长、菌丝体生长致密、次生代谢产物多,导致发酵液粘稠、溶氧量降低,进而会影响利福霉素的产量。透明颤菌血红蛋白(VHb)提高发酵液的溶氧量,故将VHb的基因整合到地中海拟无枝酸菌染色体DNA上,提高了菌株对氧气的利用率,相比原始菌株的利福霉素产量B的产量提高了14.71%,利福霉素SV的产量提高了17.38%。