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第一部分TNF-α/RIP3介导细胞坏死在急性胰腺炎发病中的作用和机制探讨目的TNF-α/RIP3介导细胞坏死在急性胰腺炎发病中的作用和机制探讨。方法选取84例急性胰腺炎(AP)患者,轻型急性胰腺炎(MAP)52例,重症急性胰腺炎(SAP)32例。搜集其临床资料并评估AP严重程度。留取患者发病后1、3、5d外周血各5ml,分离血浆并提取单个核细胞。采用半定量RT-PCR法检测TNF-α及RIP3的表达。选用实时荧光定量Real-time PCR检测mi R155表达变化。选用ELISA法检测血浆VIP水平,同时提取SAP患者血浆检测血浆内毒素水平。分析RIP3与TNF-α、mi R155、VIP、内毒素等的相关性。搜集20例健康体检外周血作为对照。结果(1)AP在发病后TNF-α/RIP3的表达均明显增高,发病后3d最高,MAP组分别为0.564±0.088和0.422±0.086,SAP组分别为0.968±0.158和0.882±0.122,发病后5d较前有所下降。SAP组TNF-α/RIP3的表达较同天MAP的表达明显增高,P<0.05。RIP3与TNF-α具有明显相关性。SAP患者内毒素水平较对照组明显增高,在发病3天最高,达74.026±18.146 pg/ml,发病后5天较前有所下降,且SAP患者内毒素水平与RIP3表达具有相关性。(2)AP发病后mi R155较对照组明显增高,以发病第3天表达量最高,MAP和SAP在发病后3天表达分别为3.494±1.189和6.369±1.807,SAP较MAP增高更为明显(P<0.05)。AP患者mi R155与RIP3表达具有明显相关性。(3)AP发病后VIP较对照组明显升高,AP发病1d时VIP明显增高,发病3d较前有所下降,后又较前升高趋势。SAP组VIP表达较同时点MAP明显增高(P<0.05),VIP与mi R155、RIP3存在相关性。结论TNF-α/RIP3可能参与了AP的发病,可能与病情的严重程度相关,SAP肠屏障功能障碍可能进一步上调RIP3的表达。Mir155及VIP与RIP3的相关性表明它们可能参与TNF-α/RIP3的调控。第二部分外源性VIP对大鼠SAP TNF-α/RIP3介导细胞坏死的作用及机制研究目的外源性VIP对大鼠重症急性胰腺炎TNF-α/RIP3介导细胞坏死的作用及机制探讨。方法选取45只SD大鼠,分SAP组、VIP干预组和SO(假手术)组。成功建立SAP大鼠模型后腹腔注射VIP 5×10-9mol作为VIP干预组。各组分别于术后1h、6h、12h处死大鼠并采集外周血和保存胰腺、肠组织。检测血浆内毒素水平,同时采用半定量RT-PCR及实时荧光定量Real-time PCR分别检测外周血及胰腺、肠组织TNF-α/RIP3和mi R155的表达,观察它们的表达变化。结果(1)SAP组外周血、胰腺组织、肠组织的TNF-α/RIP3表达较SO组均明显增高,在制模1h即达高峰,其表达分别为0.984±0.179/0.785±0.139、0.992±0.182/0.804±0.143、0.948±0.195/0.812±0.152,后缓慢下降。Mi R155的表达较SO组明显增高,在制模1h即达最高,分别为3.042±1.015、4.205±1.132、3.453±0.937,后缓慢下降。SAP组血浆内毒素水平较SO组明显增高,呈进行性增高趋势,在制模12h达52.058±6.356。(2)VIP组外周血、胰腺组织、肠组织的TNF-α/RIP3表达较SO组明显增高,但较同时点SAP组有所下降,尤以制模后6h明显,p<0.05。Mi R155的表达较SO组明显增高,同时较同时点SAP组有所增高,尤以制模后6h明显,p<0.05。VIP组血浆内毒素水平与SAP同时点相比则明显降低,以制模后6h明显,p<0.05。结论VIP可能通过下调TNF-α/RIP3的表达来改善SAP炎症反应,mi R155可能协同VIP负反馈调节TNF-α/RIP3的表达来抑制SAP炎症反应。