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目的：构建恙虫病东方体56kD表面抗原基因(sta56)片段的重组表达质粒，在E.coli中表达Sta56重组抗原，重组抗原纯化后应用于间接法ELISA、金标快速免疫层析法检测恙虫病东方体特异性抗体。 方法：从恙虫病东方体Karp株基因组中扩增出sta56基因的ORF及其中长1053bp的大片段，用TA克隆技术将此大片段克隆；以该重组质粒为模板，扩增出不同长度的截短的sta56片段，定向插入pPROEX HTb及pET30a载体，转化大肠杆菌DH5a或BL21(DE3)，IPTG诱导表达，应用SDS-PAGE观察重组蛋白表达情况，应用Western blot分析重组抗原的活性；采用电洗脱、亲和层析等方法纯化重组蛋白；纯化的重组蛋白直接包被聚乙烯96孔板，用于间接法ELISA检测恙虫病东方体IgG，或以胶体金标记重组抗原，运用金标快速免疫层析法检测恙虫病东方体IgM和IgG抗体。 结果： 1．从恙虫病东方体Karp株基因组中扩增出含sta56基因的ORF，并成功构建含sta56 ORF大片段的重组质粒TOPO-sta56。 2．以截短的sta56基因片段构建了重组表达质粒pHTbOt957、pHTbOt498、pHTbOt342和pETOt957、pETOt498、pETOt342，各重组子均可在E.coli中以融合蛋白的形式有效表达，SDS-PAGE显示各表达重组子表达不同分子量的重组蛋白，Western blot证实各重组蛋白均能被恙虫病患者阳性血清所识别。 3．电洗脱、Ni-NTA亲和层析均可用于重组蛋白的纯化，并获得高纯度的重组蛋白。福建医科大学99级硕土研究生毕业论文 中文摘要 4．纯化的重组蛋白应用于间接法ELISA检测恙虫病东方体特异性IgG，与间接免疫荧光法IFAT比较，其敏感性和特异性分别为gi．7％和76．5％。 5．纯化的重组蛋白应用于金标免疫层析法，可直接快速检测恙虫病东方体特异性 IgM和 IgG。与间接免疫荧光＄ IFAT比较，其检测 IgG的敏感性和特异性分别为94．2％和84二％。 结论：恙虫病东方体K呷株StQ56基因可在大肠杆菌获得高效表达；重组蛋白具有免疫反应性，纯化后可用作免疫诊断抗原；以重组抗原建立的间接法ELISA检测IgG，适用于大规模的流行病学调查；以胶体金标记重组抗原建立的免疫层析法，用于同时检测IgM和IgG抗体，具有简便、快速的特点，适于在缺乏实验条件的基层医院、农村对门诊病人进行诊断。