论文部分内容阅读
为了灵敏、快速、高效的检测氟喹诺酮类药物残留,本研究基于铽离子对氟喹诺酮类药物有很强的荧光增强作用,详细讨论该体系的反应条件及影响因素,以肉仔鸡为实验模型,建立高灵敏度的检测鸡肉中氟喹诺酮类药物残留的方法。1.铽增敏荧光分光光度法的初步建立样品经过预处理,通过荧光分光光度计进行扫描,发现铽离子对FQs有明显的增敏作用。分析了铽-环丙沙星、铽-诺氟沙星、铽-恩诺沙星衍生体系,摸索铽与氟喹诺酮类药物反应条件。同时,详细分析了铽-环丙沙星体系,以环丙沙星浓度(C)为纵坐标,以荧光强度(F)为横坐标,进行线性回归,并作空白对照,初步建立铽增敏荧光分光光度法,回归方程为: C = 3.0031F - 48.198 r=0.981环丙沙星浓度在1～1000ng·ml-1范围内呈线性关系,方法回收率98.92%,日内RSD=8.2%。日间RSD=10.9%。由CL=KSm/S,计算其最低检测限为1ng·ml-(1g-1)。实验表明,铽-环丙沙星、铽-诺氟沙星、铽-恩诺沙星衍生体系的最大发射波长都在545nm,最大激发波长也均在330nm左右;又因为铽增敏荧光分光光度法的检测限大大降低,为此,本方法可以作为环丙沙星、诺氟沙星、恩诺沙星药物残留的初筛方法。2.铽增敏HPLC柱后衍生法的确立用磷酸盐缓冲液提取出鸡肉组织中的氟喹诺酮类药物,过C18固相萃取柱净化,铽增敏HPLC柱后衍生法检测。色谱条件:柱温40℃;流速0.8mL·min-1;进样量20μL;衍生泵温度40℃;衍生泵流速0.5mL·min-1;荧光检测器,λEx=330nm,λEm=545nm。环丙沙星、诺氟沙星、恩诺沙星三种药物的保留时间分别为8.16 min、7.25 min和11.49min,当药物浓度在1-200ng?ml-1(g-1)时与峰面积(S)呈良好的线性关系,其线性方程分别为:环丙沙星:S环丙=59.81C+6.38 r=0.9981诺氟沙星: S诺氟=87.33C+3.81 r=0.9896恩诺沙星: S恩诺=108.47C+9.39 r=0.9823三种氟喹诺酮类药物的平均回收率及其相对标准偏差(RSD)分别为:环丙沙星:78.64%, 7.45%;诺氟沙星:80.92%,11.73%;恩诺沙星:77.70%,13.17%。其在鸡肉组织中的最低检测限分别为:环丙沙星:0.05ng·g-1;诺氟沙星:0.05ng·g-1;恩诺沙星:0.08ng·g-1。比现在报道的最低检测限降低了50倍,即灵敏度提高了50倍。3.应用铽增敏HPLC柱后衍生法检测三种氟喹诺酮类药物在鸡肉中的残留用铽增敏HPLC柱后衍生法检测肉仔鸡连续4d内服环丙沙星、诺氟沙星、恩诺沙星混合药物后的残留。停药第2d,肌肉组织中均可检测到高残留的三种药物;停药第5d,鸡肉组织中药物残留量也较高;停药第16d,诺氟沙星和恩诺沙星在肌肉组织中残留药物浓度低于我国规定的MRLs,环丙沙星在肌肉组织中仍有较高残留;停药第22d,肌肉中也检测不到诺氟沙星和恩诺沙星,但可以检测到环丙沙星;停药第29d,肌肉中三种药物均未检测到。本研究首次建立了检测鸡肉中三种氟喹诺酮类药物残留的Tb3+增敏HPLC柱后衍生法,提高了氟喹诺酮类药物的检测灵敏度,为氟喹诺酮类药物在鸡肉组织中的残留分析和研究提供了实验手段。同时,在条件摸索的过程中,建立了Tb3+增敏荧光分光光度法检测鸡肉组织中的环丙沙星的方法,样品前处理简单、快速,整个实验操作方便快捷,经济,灵敏度高,为本类药物残留检测的快速筛选提供了手段。