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目的:以52例II-III期结直肠癌患者为对象,通过免疫组织化学方法研究THBS1在结直肠癌患者淋巴结中的差异性表达以及与预后的关系;在细胞水平初步探索mir-19a对THBS1的调节作用,以期为THBS1在结直肠癌淋巴转移中的作用打下前期理论基础。方法:1、通过收集2015年1月至2017年2月在我院胃肠外科行结直肠癌根治术、病理分期为II期或者III期的患者淋巴结石蜡标本,所有患者的淋巴结经常规苏木精-伊红染色,显微镜下观察有无淋巴结转移。其中纳入研究的II期患者29人,选取区域淋巴结阴性石蜡标本29枚,纳入研究的III期患者23人,因III期个别患者术后存在1-3个淋巴结转移,故选取III期23例患者所有淋巴结阳性石蜡标本33枚,存在多个淋巴结转移的III期患者THBS1的表达水平取平均值进行分析。将选出的淋巴结石蜡标本切片行免疫组织化学实验,通过平均光密度值分析法检测有、无淋巴结转移的结直肠癌患者淋巴结中THBS1的表达情况;2、收集52例结直肠癌患者的一般临床资料,通过卡方检验分析THBS1的表达水平与结直肠癌患者临床病理特征的关系;以无进展生存时间(PFS)为观察指标,采用Kaplan-Meier法对结直肠癌患者绘制生存曲线,采用Log-rank检验比较两组患者生存时间,研究THBS1的表达水平与结直肠癌患者预后的关系;3、采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测四株不同结直肠癌细胞株(LOVO、HT116、SW480、HT29)中mi R-19a表达情况,筛选出mi R-19a表达最高和最低细胞株;4、对方法3中选出的两株结直肠癌细胞进行mi R-19a转染沉默或过表达,然后采用蛋白免疫印迹技术(Western Blot,WB)检测THBS1表达变化情况;5、用方法3中筛选出的两株结直肠癌细胞和转染沉默、过表达质粒后的两株结直肠癌细胞分别培养做细胞划痕实验,检测转染前后两株细胞的迁移能力;6、采用双荧光素酶实验对mi R-19a与THBS1 3’UTR区验证其结合情况。结果:1、免疫组织化学结果显示:THBS1在有、无淋巴结转移的结直肠癌术后淋巴结中的相对表达水平分别为0.261±0.053和0.451±0.014,有淋巴结转移的患者THBS1表达水平明显低于无淋巴结转移者,两者之间的差异具有统计学意义(P<0.05);2、结直肠癌患者淋巴结中THBS1的表达水平与患者年龄、性别、肿瘤部位、病理类型均无关(P>0.05),结直肠癌患者淋巴结中的THBS1表达水平与淋巴结是否转移有关(P<0.05);以PFS为观察指标,采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,结果显示,THBS1低表达患者表现出比THBS1高表达患者更差的生存时间,经Log-rank检验,差异具有统计学意义(P=0.007);3、mi R-19a在结直肠癌细胞株LOVO、HT116、SW480、HT29中的表达量分别为:1.00±0.09、0.64±0.02、0.56±0.02、0.38±0.06,mi R-19a在结直肠癌LOVO细胞株中的表达量最高,HT29的mi R-19a的表达量最低;4、转染质粒前:HT29细胞的THBS1的蛋白表达量高于LOVO细胞;转染质粒后:HT29在转染了mi R-19a的过表达质粒后,THBS1的蛋白表达量显著下降;LOVO在转染了mi R-19a sh RNA后,THBS1的蛋白表达量显著上升;5、转染mi R-19a sh RNA后,LOVO细胞的迁移能力显著下降;HT29细胞转染mi R-19a过表达质粒后,迁移能力显著上升;6、LOVO和HT29在转染THBS1-3’UTR Mut后,和转染THBS1 3’UTR WT相比,荧光素酶活性显著上升。结论:1、结直肠癌转移阳性的淋巴结组织中THBS1的表达量明显低于转移阴性的淋巴结组织,THBS1的表达水平可能与结直肠癌患者的预后有关,THBS1的表达水平越低,结直肠癌患者可能预后较差;2、结直肠癌细胞中mi R-19a可能通过与THBS1 3’UTR区直接结合,从而抑制THBSl的表达,最终影响结直肠癌的发生与发展。