临床分离胥伐成格隆沙门菌的抗菌药物敏感性和毒力基因研究

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目的研究临床分离胥伐成格隆沙门菌的抗菌药物敏感性、分子分型、毒力基因携带和患者临床特征,为了解胥伐成格隆沙门菌病原学特点、预防与控制其感染以及临床合理使用抗菌药物提供依据。方法1.收集2014年5月至10月我院肠道门诊急性腹泻患者的临床资料,采集患者粪便标本进行沙门菌分离培养、生化鉴定、血清型分型。2.对鉴定得到的胥伐成格隆沙门菌采用K-B法和MIC法进行11种抗菌药物敏感性检测。3.多位点序列分型(MLST):扩增胥伐成格隆沙门菌的7个管家基因(thrA,purE,sucA,hisD,aroC,hemD,dnaN),将测序结果与国际数据库网站比较后获得等位基因图谱和ST型。4.脉冲场凝胶电泳分型(PFGE):对胥伐成格隆沙门菌基因组DNA采用限制性内切酶XbaI酶切,经过脉冲场凝胶电泳后采用BioNumerics软件对电泳条带进行聚类分析。5.分析患者病史和临床表现以及与菌株分子分型的关系。6.毒力基因PCR检测:以沙门菌毒力基因岛(SPI)1~5中的代表性基因(SPI1:invA、sitC、hilA;SPI2:sseL、sifA;SPI3:mgtC;SPI4:siiE;SPI5:sopB)、毒力质粒基因(pefA、prot6E、spvB)、调控基因(phoP)为目的基因,对菌株进行特异引物PCR扩增。结果1.共分离到胥伐成格隆沙门菌16株(14.8%),占同期全部非伤寒沙门菌(108株)的14.8%。2.16株胥伐成格隆沙门菌对11种抗菌药物氨苄西林、氯霉素、链霉素、复方新诺明、四环素、萘啶酸、环丙沙星、左氧氟沙星、头孢曲松、头孢他啶、厄他培南均100%敏感。3.16株胥伐成格隆沙门菌的7个管家基因等位基因谱完全一致,依次是43、47、49、16、41、15、3,均为ST241型。4.以相似度100%为标准,16株胥伐成格隆沙门菌共获得3种PFGE带型,包括A型14株、B型1株和C型1株。A型与B型相似度为94.2%,二者与C型相似度为77.8%。5.16例胥伐成格隆沙门菌感染患者男性10例、女性6例,中位年龄35.5岁,均因急性腹泻就诊,临床诊断包括细菌性痢疾3例和胃肠炎13例,其中1例患者伴有高热。有8例患者共同进餐后发病,就诊时间集中于2014年6月17日至19日的两天之内,患者粪便分离菌株PFGE带型完全一致,均为A型。6.16株胥伐成格隆沙门菌SPI1~5代表性基因(invA、sitC、hilA、sseL、sifA、mgtC、siiE、sopB)和调控基因(phoP)100%阳性,毒力质粒基因(pefA、prot6E、spvB)均为阴性。结论1.2014年本地区出现多例胥伐成格隆沙门菌临床感染,其中包含了一起感染暴发。2.本研究检测到多种PFGE带型ST241型胥伐成格隆沙门菌临床株,对常用抗菌药物尚保持敏感,但携带SPI1~5毒力基因和调节基因,提示其具有高致病力,对公众健康构成威胁。3.应关注胥伐成格隆沙门菌临床感染在我国的变化趋势和危害,开展持续监测和研究。
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