【摘 要】
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血凝素(HA)蛋白是流感病毒囊膜表面的一种主要糖蛋白，是决定流感病毒毒力的重要因素。本研究目的在于初步探讨H9亚型禽流感病毒HA基因对宿主细胞免疫功能的影响。 本研究通
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血凝素(HA)蛋白是流感病毒囊膜表面的一种主要糖蛋白，是决定流感病毒毒力的重要因素。本研究目的在于初步探讨H9亚型禽流感病毒HA基因对宿主细胞免疫功能的影响。
本研究通过PCR技术从含有H9N2亚型禽流感病毒HA基因的重组质粒获得HA基因，并将其亚克隆到真核表达载体pEGFP-N1和pcDNA4.0，构建了pEGFP-H9HA，pEGFP-H9HA1，pcDNA-H9HA阳性质粒。转染293T细胞及BHK细胞系。通过倒置荧光显微镜观察荧光和Western-blot证实pEGFP-H9HA，pEGFP-H9HA1和pcDNA-H9HA在293T细胞和BHK细胞中可以正确表达。
将pEGFP-H9HA和pcDNA-H9HA分别与转录因子NF-κB和细胞因子IL-12 p40亚基的荧光素酶报告质粒pNFκb-Luc、IL-12 p40-promoter-pGL共转染293T细胞及BHK细胞。通过荧光素酶报告基因实验发现，转染pEGFP-H9HA和pcDNA-H9HA细胞的荧光强度明显高于转染对照质粒pEGFP-N1和pcDNA4.0的细胞。说明H9亚型禽流感病毒的HA基因可以促进NF-κB以及IL-12p40亚基的活化。并且在不同pEGFP-H9HA转染浓度下，HA引起NF-κB的活化水平不同，在高pEGFP-H9HA浓度下，NF-κB活化水平反而降低。同时，用pEGFP-H9HA1进行荧光素酶报告基因实验表明，HA1片段对NF-κB和IL-12的活化作用不明显。
本课题成功构建了研究禽流感HA基因功能的荧光素酶报告基因实验系统。通过体外实验模拟HA对细胞因子的影响，为研究禽流感病毒对宿主免疫机制的影响奠定了基础。
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