论文部分内容阅读
目的:探讨G-CSF对大鼠脑出血局部脑组织中iNOS和COX2蛋白表达的影响。方法:取健康SD大鼠42只(8周龄雄性,体重250~300g)随机分为7组:Oh组,1h组,6h组,12h组,24h组,3d组和7d组。每组各取6只大鼠,以自体血脑内注入法(右侧外囊,50ul)制作脑出血模型,分别于术后0h,1h,6h,12h,24h,3d,7d时用颈椎脱臼法处死大鼠后,迅速提取脑出血局部脑组织在-80℃冻存。实验在0-4℃环境下应用组织粉碎机及RIPA裂解液将冷冻脑组织裂解,提取蛋白质用Western blotting检测iNOS和COX2,β-actin在0h,1h,6h,12h,24h,3d,7d期间的表达变化规律。取健康SD大鼠60只(8周龄雄性,体重250~300g)随机分为5组:阴性对照组、阳性对照组(Hb)及小、中、大剂量G-CSF治疗组(25、50和75μ g/kg)。自体血脑内注入法(右侧外囊,50ul)制作脑出血模型。G-CSF治疗组术后2h和14h,经皮下分次注射G-CSF(25、50和75μ g/kg),阴性对照组和阳性对照组以同样方法注入等量生理盐水。分别于术后24h及7d时用颈椎脱臼法处死大鼠后,迅速提取脑出血局部脑组织在-80℃冻存。实验在0-4℃环境下应用组织粉碎机及RIPA裂解液将冷冻脑组织裂解,提取蛋白质用Western blotting检测iNOS和COX2,β-actin蛋白质表达水平;不同浓度的G-CSF对大鼠脑出血周边组织中NF-κB的下游靶基因iNOS,COX2蛋白质表达水平的影响。结果:在大鼠脑出血模型中iNOS的表达量在12h开始升高,24h达到高峰,3d有所下降,而COX2在6h开始升高,24h达到高峰,3d、7d后基本消失。总之,COX2在脑出血后短时间内迅速上升,24小时后表达量显著降低;iNOS的表达量脑出血后12h明显增高,7d后仍高于正常组织。小剂量G-CSF处理后24h时,G-CSF组脑出血局部脑组织中iNOS和COX2表达量均高于对照组,但与Hb组相比,两者表达无显著性差异(p>0.05);中和高剂量G-CSF处理组与Hb组相比,炎症因子iNOS和COX2的表达量有显著降低(p<0.05)并显示浓度依赖效应。G-CSF药物处理后7d,与Hb组相比,iNOS表达只在中和高剂量组有显著减低(p<0.05),而COX2表达是在3种剂量治疗组中均有显著性统计学差异(p<O.05)。结论:中、高浓度G-CSF(50和75μ g/kg)可减低脑出血周边组织中炎症因子iNOS,COX2蛋白的表达。