背景：　　子宫肌瘤是最常见的妇科良性肿瘤，尽管大多数肌瘤没有临床症状，但仍有25％的肌瘤患者表现出一系列的症状，包括异常子宫出血、盆腔疼痛、尿频、不孕及自然流产等。子宫肌瘤是子宫切除的一个常见原因，已成为主要的公众健康问题，造成了极大的社会和经济负担。　　子宫肌瘤是一种多基因多因素疾病。流行病学研究发现，子宫肌瘤的发生存在家族和种族易感性。有研究表明，较早的月经初潮和肥胖可增加罹患子宫肌瘤的风险。另外，诸如吸烟、摄入红肉、高血压、子宫感染等其他一些因素对子宫肌瘤的发生发展产生影响。　　临床及实验证据表明子宫肌瘤是雌激素依耐性肿瘤，雌激素通过雌激素受体（estrogen receptor, ER）α和β促进子宫肌瘤的生长。虽然多发子宫肌瘤与单发子宫肌瘤均来源于子宫肌层，且均表现出雌激素依耐性、相对缓慢的生长速率、缺乏侵袭和转移能力等特性，但也表现出一定的差异，多发子宫肌瘤发病年龄较小并与多种遗传综合征相关，单发子宫肌瘤手术摘除后很少复发。这些现象提示，可能存在不同的机制引起共同的子宫平滑肌细胞反应，使子宫肌瘤呈现多发和单发。基于子宫肌瘤的雌激素依耐性，我们推测组织局部雌激素及其受体的差异表达可能是导致子宫肌瘤呈现多发和单发的原因之一。　　目的：　　本研究旨在分析与雌激素密切相关的雌激素受体、与雌激素信号通路存在相互作用的丝裂原活化蛋白激酶（ mitogen-activated protein kinase，MAPK）信号通路以及雌激素受体的靶基因 c-Jun、c-Myc、cyclin D1在多发与单发子宫肌瘤中差异表达，探讨多发与单发子宫肌瘤发生发展的机制，并摸索建立子宫肌瘤平滑肌细胞有限细胞系的方法，为从细胞层面进一步深入研究打下基础。　　方法：　　1.收集2013年8月至2015年2月期间重庆医科大学附属第一医院妇产科子宫肌瘤手术切除标本35例，其中多发子宫肌瘤20例，单发子宫肌瘤15例。一部分标本液氮保存，冻存在-80℃，用于组织RNA、蛋白的提取，一部分标本4%多聚甲醛固定，用于组织切片、免疫组化。询问所有患者诊断子宫肌瘤的年龄、月经初潮年龄、孕次、产次、距离上次生产的时间，以及子宫肌瘤相关临床症状，包括腹部隆起、月经过多、痛经、腹部坠涨、下腹疼痛。根据体重和身高计算体重指数（Body mass index，BMI）。根据末次月经时间（Last menstrual period， LMP）和子宫内膜病理检查计算月经周期。术前根据超声报告和椭球体公式计算子宫体积。ELISA检测多发和单发子宫肌瘤组织中雌二醇（E2）浓度。Real-Time PCR检测多发和单发子宫肌瘤组织ERα和ERβ mRNA表达，并分析 ERα和 ERβ mRNA表达与临床指标的相关性。Western Blot和免疫组织化学检测多发和单发子宫肌瘤组织 ERα和 ERβ蛋白表达。　　2.收集2013年8月至2015年2月期间重庆医科大学附属第一医院妇产科子宫肌瘤手术切除标本35例，其中多发子宫肌瘤20例，单发子宫肌瘤15例。一部分标本液氮保存，冻存在-80℃，用于组织RNA、蛋白的提取，一部分标本4%多聚甲醛固定，用于组织切片、免疫组化。Western Blot和免疫组织化学检测多发和单发子宫肌瘤组织 p44/42 MAPK和phospho-p44/42 MAPK蛋白表达。　　3.收集2013年8月至2015年2月期间重庆医科大学附属第一医院妇产科子宫肌瘤手术切除标本35例，其中多发子宫肌瘤20例，单发子宫肌瘤15例。一部分标本液氮保存，冻存在-80℃，用于组织RNA、蛋白的提取，一部分标本4%多聚甲醛固定，用于组织切片、免疫组化。Real-Time PCR检测多发和单发子宫肌瘤组织c-Jun、c-Myc、cyclin D1 mRNA表达。Western Blot和免疫组织化学检测多发和单发子宫肌瘤组织c-Jun、c-Myc、cyclin D1蛋白表达。　　4.收集2013年8月至2015年2月期间重庆医科大学附属第一医院妇产科子宫肌瘤手术切除标本，用酶消化法和组织块法分别分离提取子宫肌瘤原代平滑肌细胞，并进行传代培养、冻存及复苏。通过细胞免疫组化和细胞免疫荧光，对培养至第4代后的子宫肌瘤平滑肌细胞采用肌动蛋白α-SMA的抗体及平滑肌细胞特异性表达蛋白 Desmin的抗体进行纯度鉴定。采用透射电镜观察培养至第4代后的子宫肌瘤平滑肌细胞和子宫肌瘤组织的超微结构。　　结果：　　1.患者的平均年龄、体重指数、平均最大肌瘤直径、平均子宫体积、首次诊断肌瘤的平均年龄、平均月经初潮年龄、平均孕次、平均产次、距离上次生产的平均时间、腹部隆起发生率、月经过多发生率、痛经发生率、腹部坠涨发生率、腹部疼痛发生率等临床指标在多发与单发子宫肌瘤组之间均无统计学差异。E2浓度在多发子宫肌瘤组明显低于单发子宫肌瘤组。ERα mRNA和蛋白表达在多发子宫肌瘤组显著低于单发子宫肌瘤组，ERβ mRNA和蛋白表达在多发子宫肌瘤组显著高于单发子宫肌瘤组。ERα蛋白阳性表达见于多发和单发子宫肌瘤组织细胞核和细胞浆，ERβ蛋白阳性表达仅见于多发和单发子宫肌瘤组织细胞核。多发子宫肌瘤组中，ERβ mRNA表达与子宫体积呈负相关（r=-0.555, P＜0.05)，与月经过多呈正相关(r=0.482, P＜0.05)，相关性均具有统计学差异。单发子宫肌瘤组中，ERα mRNA表达与月经过多(r=-0.557, P＜0.05)及初潮年龄(r=-0.525, P＜0.05)呈负相关，ERβ mRNA表达与首次诊断子宫肌瘤的年龄(r=0.524, P＜0.05)及产次(r=0.541, P＜0.05)呈正相关，相关性均具有统计学差异。　　2.无论是不考虑月经周期，还是增生期和分泌期，细胞核中的phospho-p44/42 MAPK与p44/42 MAPK比值在多发子宫肌瘤组显著低于单发子宫肌瘤组。　　3.无论是不考虑月经周期，还是增生期和分泌期，多发子宫肌瘤组中c-Jun、c-Myc、cyclin D1 mRNA和蛋白表达均显著低于单发子宫肌瘤组。c-Jun、c-Myc、cyclin D1阳性表达均见于多发和单发子宫肌瘤组织细胞核。　　4.当使用酶消化法分离提取细胞时，细胞悬液接种24-48h后，大多数细胞贴壁并开始增殖，刚开始呈星形或小梭形，随后胞体渐渐变长，呈不规则三角形或长梭形，细胞渐渐增多，相互接触和融合，纵横交错，呈涡旋状或放射状生长。当使用组织块法分离提取细胞时，接种组织块后约25-30天后开始有细胞从组织块边缘爬出，刚开始呈星形或小梭形，随着时间延长，爬出细胞渐渐增多，细胞不断增殖，约40天时相互接触和融合，呈不规则三角形或长梭形，呈涡旋状或放射状生长。培养至第4代后的子宫肌瘤平滑肌细胞α-SMA、Desmin均呈阳性表达。透射电镜提示子宫肌瘤平滑肌细胞形态结构与子宫肌瘤组织无明显差异。　　结论：　　1.子宫肌瘤组织中ERα和ERβ的表达差异可能是导致子宫肌瘤呈现多发和单发的原因所在。单发子宫肌瘤中ERα mRNA表达对月经过多这一症状可能是一种间接的保护因素，ERβ mRNA表达在多发和单发子宫肌瘤中对月经过多这一症状可能是一种预测因素。　　2.与多发子宫肌瘤相比，单发子宫肌瘤中高表达的 ERα吸收更多的E2，高水平的E2通过高表达的ERα或者高水平的ERα/ERβ比值促进了 phospho-p44/42 MAPK的表达，从而在子宫肌瘤的增殖中发挥作用。　　3.与多发子宫肌瘤相比，单发子宫肌瘤中较高水平的 E2促进了c-Jun的表达，同时诱导了c-Myc的表达，参与子宫肌瘤细胞增殖的调控。可能是ERα/ERβ比值在多发与单发子宫肌瘤E2通过AP-1路径介导的cyclin D1表达调控中发挥作用。　　4.从子宫肌瘤组织中原代提取、连续传代培养4代的细胞具有典型的平滑肌细胞形态特征及稳定的α-SMA、Desmin细胞表型，证明从子宫肌瘤组织中分离提取、纯化、培养的子宫肌瘤细胞经稳定传代培养有望建立子宫肌瘤平滑肌细胞有限细胞系。