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传染性法氏囊病(Infectious bursal disease, IBD)是由传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus, IBDV)引起的雏鸡急性、高度接触性疾病。IBDV的感染对雏鸡的法氏囊造成损伤,从而导致免疫抑制,增加了机体对其他疾病的易感性。为了克服弱毒活疫苗和中等毒力活疫苗的缺陷,本研究通过在火鸡疱疹病毒(HVT) FC126毒株的US2复制非必需区,插入IBDV超强毒株的VP2基因,构建表达VP2蛋白的重组HVT疫苗毒株,旨在为研制预防IBD和马立克氏病(MD)的二联基因工程疫苗打下基础。本研究以IBDV XD2010超强毒株为模板,通过RT-PCR扩增其VP2基因,利用HVTFC126疫苗株基因组US2同源序列、CMV启动子和绿色荧光蛋白(EGFP)基因,构建含有VP2基因的转移载体质粒pCMV-EGFP-VP2,以磷酸钙沉淀法将转移载体质粒和HVTFC126基因组DNA共同转染鸡胚成纤维细胞(CEF),通过筛选、纯化得到带EGFP标志的重组病毒rHVT-EGFP-VP2。利用Cre重组酶去除rHVT-EGFP-VP2基因组中的EGFP基因,重新转染CEF细胞,经筛选、纯化得到不含EGFP基因的重组病毒rHVT-VP2。经PCR、间接免疫荧光(IFA)和western blot鉴定,重组病毒rHVT-VP2可正确表达VP2蛋白。在重组病毒rHVT-VP2对IBDV超强毒株的免疫保护试验中,设立rHVT-VP2疫苗组、中等毒力疫苗组(N87)、空白对照组和攻毒对照组,从各试验组免疫后的法氏囊重量／体重(囊体比)的变化、发病率、死亡率、攻毒后的增重、抗体水平等方面进行免疫保护效力的评价。结果发现,rHVT-VP2组免疫后法氏囊正常,而N87疫苗组免疫后法氏囊发生了萎缩；rHVT-VP2组及N87疫苗组攻毒后的发病率、死亡率与攻毒对照组相比差异极显著；攻毒后rHVT-VP2组体重增重显著高于N87疫苗组；利用本研究所建立的间接ELISA方法检测IBDV抗体,发现rHVT-VP2能够诱导机体产生较高水平的特异性抗体,并在一定时间内持续升高,抗体水平明显高于N87疫苗组；结合各组临床症状及器官病理变化,得出结论：重组病毒rHVT-VP2有效抵抗IBDV超强毒株的攻击,且免疫保护效力高于‘N87疫苗组。重组病毒rHVT-VP2对MDV的免疫保护试验中,rHVT-VP2组对MD保护率和HVTFC126疫苗组保护率相当,证明重组病毒rHVT-VP2能使机体产生较高的免疫保护力,足以抵抗MDV RB1B强毒株的攻击。综上所述,本试验所构建的重组病毒rHVT-VP2有效抵抗IBDV超强毒株攻击的同时,又能刺激机体对MDV的侵袭产生较高的免疫保护力,是理想的能够同时抵抗IBDV超强毒株及MDV攻击的新型疫苗。