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拟南芥叶绿体的CYP亲环素蛋白位于类囊体腔内,它有五个家族成员,分别是CYP20-2、CYP26-2、CYP28、CYP37和CYP38。CYP38是PSII组装与修复过程中的关键因子。CYP38缺失的突变体植株不能形成稳定的PSII,表现出生长缓慢、光合作用效率低、对光极度敏感等性状。参与光合作用中光合电子传递链的四大复合体：PSII、细胞色素b6f复合体、PSI和ATP合成酶复合体均位于内囊体膜上,以及电子传递体-质体蓝素位于类囊体腔中。我们推测类囊体腔内CYP亲环素蛋白的其他成员也与光合大分子复合体有一定的联系。因此,本工作旨在找出类囊体腔内CYP亲环素蛋白的相互作用蛋白,从而分析CYP亲环素蛋白的其他四个蛋白是否也参与了光合作用中蛋白大分子复合体的组装与修复。本工作先从tair数据库中找出这五个亲环素蛋白的CDS全长序列,设计引物,以野生型拟南芥的mRNA为模板反转录获得了它们的cDNA片段,再在其末端添加6个His标签,构建CYPs(His)-pRI101-AN载体。将其转入根瘤农杆菌GV3101中,浸染野生型拟南芥获得转基因植株,接着对T0代转基因种子进行抗性筛选获得T1代转基因植株。然后对T2代转基因植株进行DNA水平和蛋白水平的鉴定,将鉴定成功的转基因植株种植到T3代,从T3代转基因植株中提取各自含His标签的亲免蛋白,用Ni-beads做亲和层析(Affinity Chromatography)实验。获得亲免蛋白CYP20-2、 CYP26-2、CYP37和CYP38及其互作蛋白,浓缩后对CYP20-2、CYP26-2和CYP37进行质谱分析。结果显示CYP20-2有42个互作蛋白,有17个蛋白位于叶绿体中,其中类囊体腔内的有7个,叶绿体基质中有10个,其他互作蛋白大多位于细胞核中,也有极少数位于细胞质和细胞核中。CYP37质谱分析结果显示其含有2个互作蛋白,均位于类囊体腔上,与预期的互作蛋白相符,具有重要的价值。浸染野生型拟南芥获得的转基因植株中植物体内原有的亲环素蛋白可能会影响实验结果的准确度,本研究试图通过浸染五个亲环素蛋白的纯合突变体来消除这一影响。实验室已有CYP38的纯合突变体种子CYP38-2,从ABRC (Arabidopsis Biological Resource Center)购买了其他四个蛋白的纯合突变体种子,分别浸染后获得了它们TO代的转基因种子,但由于时间的问题,只有对CYP38突变体获得的转基因植株提取了蛋白,做了亲和层析实验,还未来得及做质谱分析。